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水稻γ-氨基丁酸合成酶基因的克隆及其原核表达载体构建

γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)是一种独特的非蛋白质氨基酸,是某些生物体内的一种天然活性成分。γ-氨基丁酸在动物体内是一种抑制性神经传递物质,介导中枢神经系统64%以上的抑制性神经传导,能系统地对脑血管进行调节,增强人脑细胞功能,改善记忆力,此外γ-氨基丁酸还具有降血压、抗焦虑等生理功能。在植物体内,γ-氨基丁酸是一种植物次生代谢物,具有提高植物抵抗害虫的能力等功能。γ-氨基丁酸合成酶(GABA synthase,也称为谷氨酸脱羧酶,glutamate decarboxylase,GAD)是γ-氨基丁酸合成的关键酶。本研究采用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,从本实验室筛选出的高GABA含量的籼稻(Oryza sativa L.ssp.indica)“新-9-4”的胚芽中分离克隆出了γ-氨基丁酸合成酶基因,对该基因进行了序列分  (本文共68页) 本文目录 | 阅读全文>>

《南京医科大学学报(自然科学版)》2008年12期
南京医科大学学报(自然科学版)

人解痉多肽原核表达载体的构建及诱导表达

目的:构建人解痉多肽(hSP)原核表达载体,表达重组hSP,为功能研究奠定基础。方法:通过RT-PCR获得hSPcDNA片段,将目的基因插入原核表达载体pET32a,得到重组载体pET32a-hSP。IPTG诱导表达后行SDS-PA...  (本文共4页) 阅读全文>>

《广西医学》2008年10期
广西医学

增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及表达

目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为标记的原核表达载体,并观察EGFP基因在大肠杆菌中的表达情况。方法据已知的EGFP基因序列,设计引物,并引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点。采用PCR技术从含有EGFP的质粒pEGFP-C1中克...  (本文共4页) 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

重组IGFBP-4蛋白的表达、纯化、晶体生长及其对鹿茸细胞增殖抑制的研究

研究背景与目的:胰岛素样生长因子结合蛋白-4(insulin-like growth factor binding protein-4,IGFBP-4)作为一个重要的细胞因子,具有多种重要的生理功能。它既是构成动物GH/IGF生长轴的一个重要成员,同时又是一个重要的抗癌蛋白,对绝大多数体外培养肿瘤细胞具有抑制生长和促进细胞凋亡的作用。对IGFBP-4的研究受到越来越广泛的重视。鹿茸是一种神奇的名贵中药,不仅具有其独特的药用价值,而且具有重要的科学研究意义。在动物的进化过程中,脊椎动物逐渐失去了肢体附属器官再生的能力,但鹿茸角作为一种复杂的哺乳动物附属器官,却能每年从角柄上脱落和完全再生。而且鹿茸生长速度之快在哺乳动物组织生长中也是绝无仅有的。鹿茸角为我们研究哺乳动物组织器官的再生、创伤修复以及癌症发生等提供了理想模型。本研究通过克隆人IGFBP-4 cDNA、构建原核表达载体、并进行高效表达和纯化,利用基因工程技术来生产重组蛋白...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

1.Keap1和p65蛋白相互作用及其作用机制研究 2.Mayven不同截短体原核表达载体的构建、表达和纯化

本课题前期采用酵母双杂交系统筛选成人肝文库,得到Keap1可能与p65蛋白发生相互作用,因此本课题的主要目的是对Keap1与p65蛋白相互作用的真实性进行验证,并探索其相互作用的分子机制及其生物学意义。第一章Keap1与p65蛋白相互作用的验证目的:验证Keap1与p65蛋白相互作用的真实性。方法:采用酵母回转、免疫共沉淀、荧光共定位技术分别验证Keap1与p65蛋白在酵母细胞、真核细胞中的相互作用,并初步探讨其相互作用的结构域。结果:酵母回转验证Keap1与p65蛋白相互作用为阳性结果;免疫共沉淀证实Keap1与p65蛋白在真核细胞中存在相互作用;荧光共定位技术确定静息状态下及TNFα刺激下Keap1与p65能够共定位于细胞质。免疫共沉淀方法发现Keap1与p65的相互作用需要Keap1的全长。结论:Keap1与p65蛋白在酵母细胞和哺乳动物细胞中均存在特异性相互作用。第二章Keap1与p65蛋白相互作用对NF-κB信号通路的...  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶的活性检测及其原核表达载体的改造与应用

多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶(polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferases,ppGalNAc-Ts)是糖蛋白O-糖基化修饰的起始糖基转移酶,可将活性供体糖核苷酸UDP-乙酰氨基半乳糖(UDP-N-acetyl-D-galactosamine,UDP-GalNAc)中的乙酰氨基半乳糖(N-acetyl-D-galactosamine,GalNAc)转移至受体多肽链中丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)上,形成GalNAc α1-O-Ser/Thr结构,即Tn抗原结构。Tn抗原的形成与肿瘤的发生及转移密切相关,在70-90%的肿瘤中均发现了 Tn抗原的存在,因此对Tn抗原的生物合成及其生物学功能研究具有重要的意义。本论文用生物酶工程手段对Tn抗原的生物合成进行初步的研究,建立以廉价UDP-GlcNAc为糖基供体自主合成Tn抗原的方法。该方法具有易操作、成本低、产物纯的优势。1.Ho S...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>