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固定化木素过氧化物酶对染料的脱色降解研究

本文首先利用固定化黄孢原毛平革菌限碳培养合成木素过氧化物酶,经过酶的初步分离后,对其进行固定化;研究了单酶、双酶固定化的条件、固定化酶性质;最后利用固定化酶对染料进行了降解脱色。通过单因素和正交实验,确定聚氨脂泡沫固定黄孢原毛平革菌生产木素过氧化物酶的最优条件是:泡沫尺寸0.5×0.5×0.5cm;摇动前先静止6小时;最佳的接种量是3×10~5个/mL;最佳温度梯度是37-33℃;最佳转速梯度是140-120rpm。产酶培养基优化后结果是:最适碳源、氮源分别是葡萄糖和酒石酸铵,最适葡萄糖浓度2.0g/L;酒石酸铵浓度2.0g/L;维生素B_10.0030g/L;苯甲醇5.0mmol/L;KH_2PO_4 1.0g/L;MgSO_4·7H_2O0.025g/L;CaCl_2 0.0075g/L;微量元素液20mL/L。采用冷冻除多糖、硫酸铵盐析、透析、超滤等方法进行发酵液进行了初步分离纯化。确定硫酸铵盐析的最佳浓度是70%,粗酶液  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江工业大学
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固定化黄孢原毛平革菌生产木素过氧化物酶及其对染料脱色降解的研究

本文研究了多孔材料—聚氨脂泡沫固定化黄孢原毛平革菌合成木素过氧化物酶的产酶条件。在此基础上,研究了酶系的分离、固定化条件及固定化酶对染料的脱色降解。经研究发现:使用聚氨脂泡沫固定黄孢原毛平革菌生产木素过氧化物酶的效果很好。本文研究了五种不同类型的聚氨酯泡沫的固定化效果,经发酵试验证明聚氨脂载体3固定化菌丝的产酶较高,且发酵液澄清,对后处理有利。聚氨脂泡沫价格便宜,是比较好的固定化载体。用正交实验法对三种影响产酶较大的因素(载体量、酒石酸铵和转速)进行了优化,得到优化后的培养条件:载体量4g/L,酒石酸铵量2g/L和转速190r/min。优化后木素过氧化物酶活力可达200U/L,通过实验证明接种量对产酶影响不大。固定化菌丝重复间歇培养生产木素过氧化物酶的试验表明:重复加入与原始培养基组分相同的培养基、碳源减半或氮源减半的培养基时,均可以较早的产酶。固定化菌丝重复产酶,可以省去菌种的生长阶段,并且重复过程中碳氮源减半也节省了成本。用...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江工业大学
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木素过氧化物酶的生产、固定化及其在染料降解中应用

本文研究了利用鼓泡塔间歇培养固定化黄孢原毛平革菌合成木素过氧化物酶,通过初步分离纯化后,采用两种不同的材料进行酶的固定化,研究了固定化条件、固定化酶性质、固定化酶对染料的降解脱色。研究发现,使用鼓泡式反应器进行固定化黄孢原毛平革菌培养合成木素过氧化物酶,更有利于产酶。考察了通气量对鼓泡式反应器合成木素过氧化物酶的影响,通气量在1.2vvm对产酶比较有利,酶活达到了234U/L,与在相同的培养基和相同的固定化载体用量下的摇瓶培养产酶相比,酶活提高了近50%。发酵液经过冷冻除杂多糖、超滤、硫酸铵沉淀、透析等步骤进行初步分离纯化,比酶活提高1.85倍,酶活得率52.7%,酶活达到了1167U/L。筛选出固定化效果较好的XAD7HP大孔树脂,研究了其固定化条件。结果表明,吸附4h,吸附温度25℃,酶液pH 4.5,戊二醛浓度0.2%、戊二醛处理时间120min、获得的效果最好,固定化酶活力可达16U/g(载体)。研究了木素过氧化物酶和葡...  (本文共81页) 本文目录 | 阅读全文>>

《高等学校化学学报》2019年09期
高等学校化学学报

吸附-纤维素覆膜联合固定化酶

酶催化反应具有专一性强、 催化效率高及反应条件温和等优点, 在食品、 化工、 医药和轻工等领域应用广泛[1,2]. 但游离酶对所处的环境十分敏感, 在高离子强度、 强酸、 强碱、 高温及有机溶剂中稳定性差, 且不易回收再利用, 混入产品后纯化困难, 大大限制了酶在更多领域的应用[3,4]. 固定化酶技术是一种常用、 有效且便捷的生物酶修饰手段, 它的出现克服了游离酶的诸多不足, 对酶的催化性能和操作稳定性具有极大的改善和提升[5,6]. 经典的固定化酶制备方法可分为吸附法、 包埋法、 共价结合法和交联法[7]. 吸附法和包埋法操作简单、 成本低、 酶活回收率高, 但酶蛋白易流失、 稳定性差[8,9]. 交联法和共价结合法固定化酶可以提高酶的稳定性, 但固定化过程反应条件较苛刻, 会引起酶蛋白结构改变, 从而导致酶活回收率低[10,11]. 在提高酶稳定性的同时获得高的酶活回收率是固定化酶技术开发的一个重要方向. 近...  (本文共9页) 阅读全文>>

《食品工业》2018年05期
食品工业

共固定化酶的制备及其在奶香基料制备中的应用

共固定化酶是将两种或两种以上的酶固定于同一载体内形成共固定化系统的一种技术[1]。与普通的固定化酶相比,共固定化酶可充分发挥不同酶的特点,同时将其催化特性结合起来,充分体现协同作用,提《食品工业》2018年第39卷第5期高催化效率。同时缩短反应时间和减少反应步骤,实现连续化生产,能够更好的控制产品品质[2-3]。将共固定化酶技术应用于奶香基料的制备,不仅能简化反应工艺,还能将价格昂贵的酶重复利用,以降低生产成本。1 材料与方法1.1 材料与试剂多美鲜无盐黄油,市售;乳清粉,广州市日锋畜牧有限公司;脂肪酶A12-K、脂肪酶MER、蛋白酶MSD,阿玛诺天野酶制剂商贸(上海)有限公司;AB-8、X-5大孔树脂,沧州宝恩吸附材料科技有限公司。海藻酸钠、戊二醛、壳聚糖、乙醚、无水乙醇、KOH、CaCl2、邻苯二甲酸氢钾、酚酞指示剂等:市售,分析纯。1.2 试验方法1.2.1 大孔树脂负载壳聚糖膜交联法称取0.1 g壳聚糖溶于100 mL质...  (本文共6页) 阅读全文>>

《现代化工》2016年12期
现代化工

吸附-交联固定化酶的制备及表征

脂肪酶(lipase,EC 3.1.1.3)是一类特殊的酰基水解酶,可以在油/水界面上催化各种有机反应,并且反应条件温和,具有高度的特异性,使得其在生物技术领域非常受欢迎,如可以用来合成催化酯化、水解、醇解等反应,生产多类化学品如功能性油脂、表面活性剂、食品添加剂等。但是游离酶在使用中对环境要求十分苛刻,容易失活,稳定性差,难以重复利用,同时昂贵的价格也限制了其在酶催化领域的应用[1-3]。通过将脂肪酶进行固定化可以有效改善这些不足。传统的固定化方法包括吸附法、包埋法、交联法和共价结合法,每种方法都有其各自的优点和缺陷[4]。吸附法反应条件温和,能够最大程度地保留酶的活性,但是在实际应用中,吸附法固定化的脂肪酶由于酶与载体之间的作用力弱,随着反应的进行,酶分子很容易从载体上脱落,使固定化酶的稳定性较差[5-7]。而交联法是通过在酶分子间形成共价键来完成固定化,因此交联法的结合力强,稳定性高,可以多次重复使用[8-10]。交联法中...  (本文共5页) 阅读全文>>

《过程工程学报》2016年06期
过程工程学报

尺寸均一温敏固定化酶的制备及其在蛋白质酶解中的应用

蛋白质组学是一门后基因组学时代兴起的学科,广泛用于癌症的识别与治疗、疾病的预测等[1,2].蛋白质鉴定是蛋白质组学研究中极具挑战性的关键环节[3].目前,常用的鉴定方法是基于质谱的鸟枪法(Shotgun),将目标蛋白质进行酶解得到肽段混合物,采用液相色谱-质谱联用技术对多肽混合物进行分离和分析,将所得数据与理论蛋白质数据库进行匹配,鉴定蛋白质[4],其中酶解过程是基础而关键的步骤.传统的酶解过程基于溶液酶解法[5],存在酶解时间较长、酶自身易酶解、无法回收利用等问题.近年来,固定化酶以其较好的稳定性和重复使用性等特点而得到快速发展,并用于蛋白质酶解过程中.多种材料可作为固定化酶载体,如纤维素、多糖类、纳米硅、玻璃珠、聚苯乙烯等[6].但由于亲水性载体难富集待测样品,而疏水性载体易对蛋白质和肽段产生非特异性吸附,造成检测结果不理想[7].智能响应型载体材料的亲疏水性可根据需要调节,在实际应用中十分有优势.温度是蛋白质酶解过程中最方...  (本文共7页) 阅读全文>>