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肺癌相关蛋白的纯化

目的 利用免疫亲和层析技术用自行制备的抗人肺癌单克隆抗体mAbN-35纯化其相应的肺癌相关抗原N35蛋白。方法 培养P35杂交瘤细胞,收集培养上清,利用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单抗N-35;用纯化得到的单抗与溴化氰活化的Protein A-Sepharose CL-4B制备免疫亲和柱;再将肺腺癌GLC-82细胞的裂解液通过此免疫亲和柱,纯化肺癌相关抗原N35。结果 从肺腺癌GLC-82细胞的裂解液中纯化得到分子量为80KDa的N35蛋白,经SDS-PAGE分析达到了电泳纯。结论 应用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单克隆抗体的效率高、纯度好;应用溴化氰活化的Protein A-Sepharose CL-4B免疫亲和层析法纯化肺癌相关抗原N35也有较高的效率和纯度;纯化得到的肺癌相关抗原N35分子量为80KDa,是一种新的肿瘤相关抗原。  (本文共29页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

DLL4/Notch信号通路相关蛋白在非小细胞肺癌中的表达及初步结构生物学研究

研究背景非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer, NSCLC)是当今世界各地最常见的恶性肿瘤之一,是一种严重威胁人们健康和生命的疾病。近50多年来,世界各国特别是工业发达国家,肺癌的发病率和病死率均迅速上升。死于肺癌的男性病人已居癌症致死男性病人的首位。肺癌可依据病理分型分为小细胞癌以及非小细胞癌。非小细胞肺癌又可以分为腺癌、鳞状上皮细胞癌、细支气管肺泡癌、未分化大细胞癌、支气管腺瘤,其中腺癌的所占的发病比例及致死率越来越高。由于腺癌具有起病隐匿,发现较晚,转移较快的特点,对医生而言,大多数患者在发现时已经失去手术机会。而且肺腺癌对放化疗不甚敏感,治疗棘手,总体治疗效果不理想,死亡率较高。近年来,有学者以肿瘤血管生成理论为基础,提出肿瘤靶向治疗概念,即在肿瘤生成、生长过程中,使用药物或其他手段阻断肿瘤血管生成,导致肿瘤的血流供应、养分供应中断,以达到使肿瘤细胞死亡,肿块减小或消除的目的。基于该理论开发...  (本文共115页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

蛋白质组学方法筛选肺癌相关蛋白及人源性肺癌单链抗体库的构建

肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一,也是目前全世界发病率和死亡率最高的癌症。肺癌的发生、增殖、侵袭是多因素参与、多步骤完成的,虽然从基因水平和转录水平已对肺癌进行了许多成功的研究,但其癌变机制仍不十分明确,也缺乏有效的用于肺癌预警和预后监测的特异分子标志物。因而能够高效率、高通量地筛查组织中与肺癌发生、发展相关蛋白并制备其抗体,在肺癌肿瘤的预警、筛检、预后、治疗中显得极为重要。本课题应用蛋白质组学技术对肺癌组织与配对的癌旁组织的蛋白质组进行筛选和识别,根据蛋白质表达差异筛选肺癌相关蛋白;运用蛋白质纯化技术从肺癌组织中获得HSP70纯品,并从噬菌体表面展示技术构建的人源性肺癌单链抗体库中初步筛选到融合抗体。对我国高发肿瘤的防治实践有重要的应用价值,对阐明肺癌发生的分子机制和预后研究以及靶向治疗有重要理论意义。研究方法:1 蛋白质组学方法筛选鉴定肺癌相关蛋白1.1 收集16例手术切除的新鲜肺癌组织及同一患者手术的癌旁组织,标本均于...  (本文共149页) 本文目录 | 阅读全文>>

《新乡医学院学报》2011年06期
新乡医学院学报

肺癌相关蛋白N35的纯化及鉴定

目的利用免疫亲和层析技术用自行制备的抗人肺癌单克隆抗体N35纯化其相应的肺癌相关抗原N35蛋白并对其进行鉴定。方法培养P35杂交瘤细胞,收集培养上清,利用Protein A-Sepharose CL-4B亲和层析法纯化单抗N35;用纯化得到的单抗与溴化氰活化的Protein A-Sepharose CL-4B制备...  (本文共5页) 阅读全文>>

《昆明医学院学报》2000年04期
昆明医学院学报

肺癌单抗识别的肿瘤相关抗原特性分析

用免疫沉淀和免疫印迹法测定肿瘤相关抗原N - 35在不同肿瘤细胞及正常人心脏和肺组织的存在和分布情况 ;用N -聚糖酶酶解方法确定与单克隆抗体N - 35相对应的相关蛋白为一糖蛋白分子 ,不存在于正常人心脏及肺组织蛋白组分中 ,而以不同分子量形式分布于...  (本文共7页) 阅读全文>>

中国人民解放军军医进修学院
中国人民解放军军医进修学院

肺癌转移相关蛋白(LCMR1)的原核表达、多克隆抗体制备及其应用的初步研究

目的:肺癌转移相关蛋白LCMR1是我们实验室采用mRNA差异显示技术克隆到的新基因(GenBank ID:AY148462),本课题拟通过原核表达获取LCMR1纯化融合蛋白质,并制备LCMR1抗体,然后在蛋白质水平研究LCMR1在多种组织和细胞中的表达,进一步研究该基因的功能。方法:(1)优化pGEX-5T/LCMR1原核质粒的表达条件,使之在大肠杆菌系统稳定地表达融合蛋白GST-LCMR1,然后应用亲和层析技术纯化融合蛋白并通过wes tern B1ot免疫印迹和MALDI-TOF-MS技术对纯化的蛋白进行鉴定;(2)通过应用GST-LCMR1蛋白免疫新西兰兔和免疫原性肽抗体技术两种不同策略制备LCMR1抗体:(3)应用免疫组织化学技术和组织芯片技术对LCMR1在多种细胞和组织中的表达进行研究。结果:(1)确定了LCMR1原核表达的关键表达参数:诱导温度为20℃、诱导时间为4h及诱导剂IPTG终浓度为0.6mmol/L,使之可...  (本文共92页) 本文目录 | 阅读全文>>