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以壳聚糖为载体亲和层析胰蛋白酶

胰蛋白酶属于内切酶,专一水解精氨酸、赖氨酸羧基参与形成的肽键、酰胺键和酯键,应用广泛,经济价值高。本研究的目的是制备一种廉价的亲和吸附剂用于胰蛋白酶纯化,研究亲和吸附剂制备工艺及纯化胰蛋白酶的操作条件,并研究纯化后胰蛋白酶的性质。提出一种亲和吸附剂的制备工艺,这种亲和吸附剂以壳聚糖为载体,鸡卵类粘蛋白为配基。用盐析的方法从鸡蛋清中提取鸡卵类粘蛋白,用离子交换层析进行纯化。将壳聚糖以简单易行的凝结法制备壳聚糖微球,然后与鸡卵类粘蛋白交联制备亲和吸附剂。以壳聚糖为载体的亲和吸附剂制备过程,与常用的以琼脂糖为载体的制备过程相比较,更加简单,安全。对亲和吸附剂的制备工艺条件进行了研究。结果表明:在4℃、pH3.5条件下盐析鸡卵类粘蛋白,收率最高,约为16.8%;使用4%NaOH、30%乙醇的水溶液作为凝结液,可有效制备大量壳聚糖微球;配基与活化后的载体交联1h,达到饱和,交联结果为1g壳聚糖对鸡卵类粘蛋白的偶联量为60mg,相应地,对胰  (本文共54页) 本文目录 | 阅读全文>>

《天然产物研究与开发》2006年06期
天然产物研究与开发

以壳聚糖为载体亲和层析胰蛋白酶

用活化的壳聚糖为载体,鸡卵粘蛋白(CHOM)为配基,制备了胰蛋白酶的亲和吸附剂。采用该吸附剂亲和层析胰酶,所得产物经SDS-PAGE电泳检测...  (本文共5页) 阅读全文>>

西南农业大学
西南农业大学

草鱼胰蛋白酶的纯化及部分性质研究

动物体内有多种蛋白消化酶。蛋白消化酶类协同作用,分解蛋白质,利于肠道对氨基酸的吸收。胰蛋白酶、糜蛋白酶和弹性蛋白酶存在于几乎所有脊椎动物和无脊椎动物的消化道内,它们属于肽链内切酶。胰蛋白酶是其中一种重要的动物蛋白水解酶,专一性强,专一水解精氨酸、赖氨酸(三种碱性氨基酸之两种)羧基参与形成的肽键、酰胺键和酯键,其高度专一性表现为对碱性氨基酸一端的选择,属于族专一性(基团专一性)。本研究目的是草鱼肝胰脏中纯化胰蛋白酶并对其性质进行分析研究。草鱼胰蛋白酶(GT)的纯化:本实验采用硫酸铵分级沉淀和鸡卵类粘蛋白偶联的琼脂糖凝胶亲和层析,得到两种酶,即胰蛋白酶A(GTA)和胰蛋白酶B(GTB)。胰蛋白酶用0.5 M NaCl,0.05 M CACl_2,0.05 M Tris-HCI(pH8.0)粗酶抽提缓冲液抽提出来,得到粗酶抽提液。将粗酶抽提液加入固体硫酸铵至30%饱和度,4℃静置3h后,离心(8000 rpm,0℃,20 min),将...  (本文共53页) 本文目录 | 阅读全文>>