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RNA干涉技术在烟草抗TMV病毒育种中的应用

烟草病毒病是世界各烟草产区普遍发生的一类主要病害,也是其它农作物的主要侵染毒源,其种类多,危害严重。生产中常以选用抗病品种作为主要防治手段,但抗病品种存在抗性单一、抗性资源狭窄等局限,不能持久、有效地控制病毒危害。RNA干涉技术为病毒病害的防治开拓了一条新机制。本试验依据RNAi机制,以TMV复制酶基因部分序列为靶序列,经反向重复连接构建到含35S超强启动子的表达载体,转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌LBA4404中,完成植物双元表达载体系统构建。经叶盘法转化获得11株转基因烟草苗。经人工接毒验证,其中7株对TMV具有免疫级抗性。初步证实了RNAi在增强植物抵抗病毒能力方面的显著效果。试验主要内容包括:1.目的基因靶序列的克隆首先对TMV 5种分离株复制酶基因序列进行BlastP序列比对,寻找保守序列,确定进行RNAi的靶序列,设计靶序列引物TMV-r1/TMV-r2。从黑龙江省烟草研究所试验场采集感染普通花叶病的烟草幼嫩叶片,提  (本文共74页) 本文目录 | 阅读全文>>

黑龙江八一农垦大学
黑龙江八一农垦大学

RNA干涉技术在烟草抗TMV和PVY病毒育种中的应用

烟草普通花叶病和烟草马铃薯Y病毒病是世界各烟草产区普遍发生的一类主要病害,也是我国北方烟区的主要病毒病害,尤其对我国黄淮烟区和东北烟区的影响较为严重,他们严重影响烟叶的产量和品质,而且在烟株上经常复合侵染,加大病害的防治难度。选育抗病品种是生产中防治病害的主要手段,但存在着抗性资源狭窄、抗病品种选育时间慢等诸多局限,不能有效地控制复合侵染对烟草生产带来的危害。随着分子生物学的发展,RNA干涉技术为病毒病害的防治提供了一条新途径。为了解决TMV和PVY复合侵染对烟草生产带来的危害,本试验以RNAi机制为依据,设计了双基因融合的RNAi靶序列,并成功构建植物双元表达载体系统。农杆菌侵染叶盘,最终获得9株转基因烟草苗。经PCR检测、TMV与PVY病毒验证,3株转基因烟草对TMV和PVY具有免疫级抗性。证实了以RNAi为基础的双基因融合策略在增强植物抵抗两种病毒侵染方面的效果。本试验主要内容如下:1.TMV和PVY目的序列的克隆分别对T...  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江林学院
浙江林学院

松材线虫的人工饲养和RNA干扰研究

松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)病是松树上的一种毁灭性病害,具有危害性大、传播速度快、防治难度大等特点,是世界性检疫对象。前人对松材线虫病的病源、致病机理以及防治技术进行了大量的研究。自发现松材线虫病起,国内外投入了大量的人力、物力和财力来防治该病,但该病到目前为止还没有得到有效控制,且仍有继续蔓延的趋势。本研究在前人研究的基础上就松材线虫简便有效人工饲养方法的建立和利用RNA干扰技术抑制松材线虫的繁殖进行了初步研究,结果表明:1.50条松材线虫在培养9天后就进入了大量繁殖的指数生长期,培养10天松材线虫的数量可扩大300倍,培养15天数量可扩大数千倍。2.在传统形态分类上,松材线虫和拟松材线虫主要依靠雌成虫的尾部特征来区分,幼虫则较难鉴定。本实验根据两者在ITS-1区的细小差别设计了引物,PCR反应后电泳,用SF+R引物能出现约340bp长度目的条带的就是松材线虫,而用NF+R引物有目的条带的为...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

《新医学》2019年10期
新医学

循环非编码RNA作为生物标志物在心血管疾病中作用的研究进展

心血管疾病(CVD)是全球范围內人类健康的重要威胁之一。考虑到CVD所带来巨大的社会负担,关于疾病管理方面的进步不应仅局限在对这些疾病的治疗研究,还应着眼于开发早期检测和预防CVD的平台。近些年,多个与CVD相关的生物标志物被发现并应用于临床。根据美国临床化学协会(AACC)的要求,目前临床上常用的心脏生物标志物是心肌钙蛋白和肌酸激酶(CK)。然而,随着深度RNA测序技术的发展和进步,包括非编码RNA(ncRNA)在内的基因组新成员逐渐被发现,它们不编码蛋白质,但可以调节基因的功能,从而调节一系列生理及病理过程。根据功能、长度和结构不同,ncRNA可分为转移RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)、小核RNA(snRNA)、小核仁RNA(snoRNA)、引导RNA(gRNA)、微小RNA(miRNA)、长链ncRNA(lncRNA)、环状ncRNA(circRNA)等。其中miRNA和lncRNA在CVD的治疗、预后和诊断中...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中外医疗》2019年26期
中外医疗

长链非编码RNA与非酒精性脂肪性肝病

非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liverdisease,NAFLD)作为代谢综合征(metabolic syndrome,MetS)在肝脏的表现,与肥胖、胰岛素抵抗(IR)、糖尿病、高脂血症等代谢异常具有密切的联系[1],其疾病谱包括从单纯的肝脏脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)、肝纤维化,甚至可以进展成肝硬化和肝癌[2]。全球约有接近24%的成年人患NAFLD,已成为全球慢性肝病的最常见病因,在亚洲NAFLD在人群中的发病率为27%,仅次于发病率最高(32%)的中东,NASH已成为肝移植的第二大病因,对世界公共健康造成了巨大的威胁[3]。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)是由一类长度超过200个核苷酸组成的转录本,不具有编码蛋白质的能力但具有一些蛋白质编码m RNA典型特征[4],且参与许多生物...  (本文共3页) 阅读全文>>

《医学综述》2019年20期
医学综述

微RNA调控骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展

间充质干细胞具有来源方便,易分离、培养扩增、纯化及多向分化和增殖能力,其可在适宜的体外环境多向分化,具有向成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及肝细胞等分化的特性,这使其在重建退化组织及相关骨疾病的临床应用中具有广阔的前景[1]。微RNA(microRNA,miRNA)是由19~25个核苷酸组成的非编码小分子RNA,其主要参与了细胞的增殖、分化、凋亡等生命活动,广泛存在于各个生物群体中,miRNA的分子结构包括非编码区(untrans-lated region,UTR)及内含子间隔开的编码区。大量研究表明,miRNA在生物细胞的增殖、分化,病毒感染及肿瘤细胞增殖过程中起关键作用[2-4]。miRNA的产生是由RNA聚合酶Ⅱ与DNA生成初级转录物(pri-miRNA),pri-miRNA典型的茎环结构经过核糖核酸酶Ⅲ内切酶加工后由转运蛋白运送到细胞质,生成具有茎环结构的前体miRNA,前体miRNA在细胞质中核酸酶与RNA解旋酶的作用下生...  (本文共5页) 阅读全文>>

《国际消化病杂志》2019年05期
国际消化病杂志

药物性肝损伤与非编码RNA的研究进展

肝脏是药物代谢的主要场所,大部分药物在肝脏中代谢,最终转化为无活性的代谢产物排出体外,部分药物或其代谢产物具有肝脏毒性,可造成肝脏损伤,即药物性肝损伤(DILI)。中国各地医疗水平发展不均,部分地区存在用药不当的情况,DILI发病率呈现逐年升高的趋势。DILI的发病机制尚不明确,如何对DILI进行早期诊断、有效控制病情进展、减少肝衰竭的发生以及优化病情监测成为了国内外研究者讨论的热点。非编码RNA(ncRNA)参与基本的细胞生理过程,在DILI中发挥着重要的作用。本文就DILI与ncRNA的相关研究进展作一综述。1 DILI有多种药物可引起DILI,包括抗生素类药物(抗结核病药物、大环内酯类、四环素类、磺胺类、抗真菌类等)、非甾体抗炎药、抗精神病药、抗抑郁症药、镇静催眠药、抗肿瘤药、抗心律失常药、降脂药、部分口服降糖药及中草药等。超过1 000种药物与肝损伤相关,有300余种已被证实与肝损伤明确相关[1]。其中,以抗生素类药物引...  (本文共5页) 阅读全文>>