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技改创新独领风骚

在金融危机肆虐的2009年,技术改造创新无疑是及时求变、提升企业市场竞争力最关键、最核心的一笔。“困则思变,  (本文共1页) 阅读全文>>

权威出处: 宁夏日报2010-01-03
东北农业大学
东北农业大学

苏云金芽胞杆菌Vip3Aa蛋白杀虫活性关键位点的研究

营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal proteins,VIPs)是一类在苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)营养期分泌的新型杀虫蛋白,对鳞翅目害虫具有较好的杀虫活性,Vip蛋白与任何已知的杀虫晶体蛋白没有同源性,其杀虫机理也与杀虫晶体蛋白不同。Vip蛋白不仅能够扩大Bt的杀虫谱,同时可以抑制或延缓农业害虫抗药性的产生,具有十分重要的应用前景,这也使得Vip蛋白引发了人们的日益关注。然而,Vip蛋白的三级结构目前尚未被解析,结构与功能之间的关系还未被人们所了解,并且存在杀虫活性有待进一步提高等问题,所以急需对该蛋白的结构功能进行研究,寻找杀虫活性关键氨基酸位点。本文运用定点突变的方法对Vip3Aa11杀虫活性关键氨基酸位点进行了探讨,并摸索建立了 Vip3Aa11随机突变的方法,筛选出活性改变的突变体,为改造Vip蛋白奠定了理论及实验基础。虽然Vip3Aa蛋白之间的序...  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>

华侨大学
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苏云金芽胞杆菌Cry毒素蛋白抗蚜活性评价及其作用机理研究

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在其芽胞形成阶段产生的Cry毒素,是一类对多种农林害虫具有特异杀虫活性的毒素蛋白。cry基因已被广泛用于构建抗虫转基因作物,成为农业生产中防治鳞翅目、鞘翅目等Cry靶标昆虫的一种有效途径。随着这些转基因作物种植面积日益增大,对Cry不敏感的蚜虫占据了Cry靶标昆虫的原有生存空间,从次要害虫逐渐升格为主要害虫。目前控制蚜虫主要采用化学法,这与扩大转基因作物减少化学农药使用的目的背道而驰。因此,探究蚜虫对Cry毒素蛋白不敏感的原因,揭示Cry抗蚜机理具有重要的理论意义与应用前景。首先,本研究对不同Cry毒素的抗蚜活性进行评价。在大肠杆菌中表达了不同的Cry毒素:Cry1Ab1、Cry2Ab12、Cry7Ab4、Cry-related(一种Cry41同源蛋白,迄今抗蚜活性最高的Cry蛋白)和SCAN2-2(Cry46同源蛋白),并构建了cry2Ab12转基因烟草、cr...  (本文共116页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

苏云金芽胞杆菌以色列亚种生产菌株Bt-59的sigK突变研究

苏云金芽胞杆菌以色列亚种(Bacillus thuringiensis var.israelensis,Bti)是用于防治蚊、蚋等病媒生物的重要生物因子,但实际应用中存在毒力水平不够高、持效期短等问题。Sigma K(σK)因子在芽胞杆菌中能够控制芽胞形成、母细胞裂解等,同时通过Sigma(σ)因子间的级联调控,影响杀虫蛋白的形成。本文通过构建缺失σK因子的Bti突变菌株,研究了 sigK缺失对Bti生产菌株Bt-59的影响,为构建高毒力活性、持效期长的工程菌提供参考。主要研究结果如下:(1)构建了 Bt-59的sigK缺失突变菌株Bt59(△sigK):通过对Bt-59菌株全基因组测序分析,确定sigK基因的位于Genomel 05261,大小为714bp,编码237个氨基酸,与已报道的其他Bt亚种相似性均为100%。通过扩增sigK基因同源臂构建敲除载体pMADAsigK,电击转化Bt-59感受态菌株,筛选获得同源重组缺失s...  (本文共67页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

贵州地区苏云金芽胞杆菌杀虫新基因的挖掘与功能验证

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)自从被发现至今已被广泛的应用于农业生产、森林保护、园林防治以及卫生害虫的防治。目前,越来越多的Bt制剂和Bt作物得到了广泛的开发和应用,在防治害虫方面取得了良好的防治效果。自20世纪20年代以来,Bt蛋白就已经用于农业害虫的防治,并取得了上佳的效果。因此,分离筛选高效、广谱杀虫活性的Bt菌株,克隆新的杀虫活性基因,为生产实践防病治虫提供新的资源。本研究通过广泛采取收集贵州地区土壤腐殖质,以此分离筛选了一批Bt菌株,并对其进行基因型鉴定、杀虫活性分析,得到一批鳞翅目害虫具有杀虫活性的Bt菌株,并从CS137-2和CS72-1两个菌株中克隆得到3个新的Bt基因。对贵州多个地区共收集1170份样品进行芽胞杆菌抗生素分离处理,总共获得976株芽胞杆菌,鉴定出181株Bt菌,平均分离率超过了18%。对得到这的一百多株Bt菌进行基因型分析,发现其中含cry1、cry2、...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京理工大学
北京理工大学

苏云金芽胞杆菌的分泌蛋白组研究

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在产生芽胞的同时可以产生具有杀虫活性的晶体蛋白,是一种应用广泛的微生物杀虫剂。作为一种革兰氏阳性菌,细胞壁成分简单,胞外蛋白分泌到培养基时无需穿过细胞壁外膜,是一种良好的分泌表达外源蛋白的候选宿主。然而Bt分泌的蛋白水解酶可能会影响目标蛋白的产量。因此,研究Bt分泌蛋白组,可为后续敲除蛋白水解酶基因,构建苏云金芽胞杆菌分泌表达宿主奠定基础。将Bt在对数期与过渡期的转折点定为T0,T0前1 h为T-1,T0后1 h为T1、2h为T2,依此类推。本研究探索制备Bt胞外蛋白样品的方法,并对其进行了优化,采用电泳切胶的方式去除培养基中的干扰蛋白,经胶内酶解后质谱检测了Bt_HD73在LB培养基中T-1、T1、T5、T14、T21等5个时期的分泌蛋白质,并以Bt_HD73基因组数据库对质谱结果进行检索,分析各时期分泌蛋白的种类、含量。结果表明,Bt_HD73各时期共鉴定得...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>