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牛卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植

1.本研究比较了不同类型血清、不同来源的激素以及大卵泡液对牛卵母细胞体外成熟的影响。在无大卵泡液存在时,成熟培养液中添加发情牛血清(OCS)和胎牛血清(FBS),卵母细胞的体外成熟率显著高于添加新生牛血清(NCS)时的成熟率(83.1%,82.9%比53.0%,P<0.01);在培养液中添加3%大滤泡液(BFF)时,OCS和FBS内卵母细胞的成熟率明显高于NCS内的成熟率(85.1%,83.5%比57.7%,P<0.01)。结果表明:本实验条件下,OCS和FBS可以显著提高卵母细胞的成熟率,而NCS不适合于牛卵母细胞的体外成熟;BFF添加与否不影响卵母细胞的成熟率。在培养液中添加低纯度的FSH(10μg/ml)和LH(20μg/ml)或高纯度的HMG(含0.075U/ml FSH+0.075U/ml LH)对牛卵母细胞体外成熟无显著的差异。2.比较了几种不同的化学激活方法对牛卵母细胞激活的影响,为体细胞核移植胚胎的激活确立激活条  (本文共143页) 本文目录 | 阅读全文>>

广西大学
广西大学

水牛卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植的研究

1.系统探讨了放线菌酮(CHX)和细胞松弛素B(CB)对水牛卵母细胞孤雌激活的影响。IVM27~28h的水牛卵母细胞经7%酒精(EH)激活处理5min后,经7%酒精(EH)激活处理5min后,置入不同浓度的(0,0.625,1.25,2.5,5μg/ml)放线菌酮(CHX)培养10h,而后固定染色或在胚胎培养液(CM)中继续培养检查激活分裂率。结果培养在0.625和1.25μg/ml CHX的卵母细胞的激活分裂率和总原核形成率明显高于对照组(P<0.05),而培养在5μg/mlCHX的卵母细胞的激活分裂率和原核形成率则极显著低于对照组(P<0.01)。如果在含有0.625μg/ml CHX中添加3μg/ml CB,可明显提高双原核的形成率(38.9%vs15.1%,P<0.05)和桑椹胚/囊胚发育率(40.7%vs26.8%,P<0.05),但对其激活分裂率和总原核形成率无明显影响(P>0.05)。结果表明,适当浓度的CHX能提...  (本文共129页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

绵羊卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植

哺乳动物体细胞核移植是一项复杂而有序的操作过程。本文从不同方面研究了绵羊卵母细胞的体外成熟、孤雌激活以及重构胚的构建过程,建立了一套比较稳定的核移植体系,其结果如下: 1. 分析了EGF 不同添加量、FSH:LH 的不同配比和不同大小卵泡的卵泡液对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响。结果表明:(1)添加30ng/ml EGF 显著高于其他试验组的成熟率(85.0% vs 60.0%, 71.7%, 72.7%, P﹤0.05),并可提高绵羊孤雌激活胚的囊胚发育率;(2)成熟液中添加FSH 1μg/ml,LH 5.0IU/ml成熟率最高;(3)在绵羊卵母细胞成熟液中添加3%绵羊大卵泡液,在成熟率上极显著高于小卵泡液的20%添加组(78.6% vs 36.5%,P﹤0.01),显著高于小卵泡液的3%添加组和未添加组(78.6% vs60.0%, 67.5%, P0.05),培养24h卵母细胞冷冻保存后,卵裂率、囊胚率与培养0h、16h、2...  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

内蒙古大学
内蒙古大学

绵羊卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植的研究

自从第一例哺乳动物克隆成功以来,至今多数实验室仍一直沿用显微操作进行去核与注核。其操作过程复杂,需要操作者具有丰富的经验,致使该克隆方法不能普遍推广。为了降低传统核移植方法的技术难度,本研究比较了不同浓度离子霉素、两种不同激活方法对绵羊卵母细胞孤雌发育的影响,优化了去透明带卵母细胞核移植中的几个重要参数(成熟培养时间、融合电压、激活与培养方法),探索了一种简化的核移植操作程序。一、绵羊卵母细胞孤雌激活:1.分别采用oμM、2.5μM和5μM离子霉素+2mM6-DMAP激活去除透明带卵母细胞时,卵裂率分别是18.8%、78.9%和73.9%,囊胚发育率分别为0%、13.7%和11-3%(第7天统计发育结果);采用同样的激活方法激活保留透明带的卵母细胞时,卵裂率分别为14.5%、72.5%和88.5%,囊胚发育率分别为0%、13.8%和14.7%;表明无论是保留透明带,还是去除透明带的卵母细胞激活后各处理组的卵裂率与囊胚率均高于对照...  (本文共53页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

提高绵羊体细胞核移植效率的研究

本研究对绵羊卵母细胞体外成熟、卵母细胞冷冻保存、卵母细胞孤雌激活、绵羊同种和异种体细胞核移植及重构胚胎体外培养等关键技术进行了试验分析,以期提高绵羊体细胞核移植的效率,建立完善的核移植技术体系,为进一步获得体细胞克隆绵羊和异种克隆个体提供技术支撑。本研究内容包括以下几个方面:(1)在绵羊卵母细胞成熟培养液中添加孕酮等某些影响体外成熟的成份,确定绵羊卵母细胞的最佳成熟方案。(2)并通过对比不同冷冻保护剂对卵母细胞的冷冻保存效果,为核移植操作批量提供成熟的卵母细胞。(3)采用胞质注射法,建立精子提取物激活卵母细胞的方法,并且与离子霉素结合6-DMAP激活法和电激活法进行了比较,筛选出适宜激活方法。(4)体外分离培养得到道赛特绵羊和莎能奶山羊的耳皮肤成纤维样细胞,对绵羊皮肤成纤维细胞的生物学特性和不同细胞因子对其生长增殖的影响进行了研究,并对绵羊成纤维细胞和山羊成纤维细胞分别进行体外传代及冻存,为绵羊体细胞核移植和绵羊-山羊种间核移植...  (本文共137页) 本文目录 | 阅读全文>>

西南大学
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水牛—牛异种体细胞核移植研究

异种体细胞核移植研究可以揭示不同动物之间细胞核质互作的特征和规律,在实践上可以使珍稀濒危动物的快速繁育变得可行。本研究利用体细胞核移植技术路线,对水牛—牛异种体细胞核移植进行了初步探索。重点从受体卵母细胞胞质成熟时间、激活方法、供体细胞处理、胚胎培养系统等几个方面做了研究,建立了本实验的体细胞核移植技术平台;通过该平台对水牛—牛异种体细胞核移植胚胎发育的可能性进行了探索性研究;并对水牛—牛异种体细胞核移植早期胚胎发育效率与水牛、牛同种体细胞核移植进行了比较。1、体细胞核移植技术平台建立1)首先,本试验利用牛卵母细胞孤雌激活的方法,比较了几种不同的化学激活方法,发现联合激活方法比单一化学试剂激活方法效率高,而在联合激活的方法中,Ionomycin+6-DMAP激活效率最好,其激活后8-细胞~桑椹胚发育率明显高于EH+6-DMAP(22.0% vs.15.2%,p<0.05)与A23187+6-DMAP(22.0% vs.9.8%,...  (本文共54页) 本文目录 | 阅读全文>>