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锤头状核酶、反义RNA对大鼠肺动脉平滑肌NHE-1活性及细胞增殖的作用

肺血管重构是低氧性肺动脉高压的主要特征,主要表现为肺动脉平滑肌细胞过度增殖,可能与生长因子和血管活性物质等激活细胞Na~+/H~+交换有关。Na~+/H~+交换激活后,使肺动脉平滑肌细胞在增殖早期即出现细胞内pH(pHi)明显增高,对其增殖具有容许性作用。Na~+/H~+交换器-1(NHE-1)几乎在所有真核细胞膜均有表达,介导1:1的细胞内H~+和细胞外Na~+交换,参与调节pHi等。肺动脉平滑肌细胞膜亦有NHE-1表达,在低氧条件下表达明显增高,其特异性抑制剂可明显抑制肺动脉平滑肌细胞增殖。因此本实验通过将NHE-1特异性锤头状核酶和反义RNA体外转染肺动脉平滑肌细胞,并检测细胞中NHE-1表达、Na~+/H~+交换活性、pHi的变化,及其与细胞增殖变化的关系,探讨NHE-1在肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用。研究内容包括:1.根据大鼠NHE-1mRNA序列,设计并合成两条锤头状核酶,应用PCR方法扩增获得反义RNA序列;并将其  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国应用生理学杂志》2007年04期
中国应用生理学杂志

阿米洛利抑制NHE-1减轻低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖

目的:研究Na+/H+交换抑制剂阿米洛利对低氧刺激的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响,以及Na+/H+交换体-1(NHE-1)活性和表达的变化。方法:常氧(21%O2)或低氧(2%O2)条件下培养PASMCs,并分别给予浓度为1.653、3.125、6.25、12.5、25和50μmol/L等不同浓度的阿米洛利,培养24h,采用MTT比色实验和免疫组化检测PCNA阳性细胞率的方法反映细胞增殖情况,同时采用激光共聚焦检测...  (本文共5页) 阅读全文>>

《Chinese Medical Journal》2002年01期
Chinese Medical Journal

NHE-1与大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡(英文)

目的 探讨Na+ /H+ 交换器 1(NHE 1)、细胞内pH对肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的作用。方法 实验分对照组和低氧 3周组 ,大鼠常压低氧 3周后 ,分离肺动脉平滑肌层 ,测定细胞内pH ,并应用RT PCR技术 ,检测NHE ...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国现代医学杂志》2010年18期
中国现代医学杂志

人NHE-1基因miRNA干扰载体构建、鉴定及干扰效应评价

目的构建人钠氢交换蛋白-1(NHE-1)基因的miRNA特异性干扰表达载体并转染293细胞,筛选其有效性。方法设计4对miRNA oligo,依次通过退火、连接,构建含NHE-1前体miRNA的重组干扰质粒pcDNATM 6.2-GW/NHE-miR和阴性对照质粒pcDNATM 6.2-GW/neg-miR,并转染...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国应用生理学杂志》2003年01期
中国应用生理学杂志

体外转染NHE-1核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 :探讨锤头状核酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞Na+ /H+ 交换器 1 (NHE 1 )表达和活性、pHi的影响 ,及其与细胞增殖的关系。方法 :构建含锤头状核酶序列的 pLXSN反转录病毒重组载体 ,将其转染体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞 ,G41 8筛选后获取含有重组载体的细胞克隆 ,...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国病理生理杂志》2001年03期
中国病理生理杂志

NHE-1与大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡

目的 :探讨Na+ /H+ 交换器 - 1(NHE - 1)、细胞内pH对肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡的作用。方法 :实验分对照组和低氧 3周组 ,大鼠常压低氧 3周后 ,分离肺动脉平滑肌层 ,测定细胞内pH ,并应用RT -PCR技术 ,检测NHE -...  (本文共3页) 阅读全文>>