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小鼠腭裂相关基因的克隆、筛选及功能的研究

腭裂是口腔也是全身较常见的先天性发育畸形,在亚洲、尤其是中国更是高发区。1996~2000年全国出生先天性畸形缺陷检测结果显示,先天性唇腭的发生率排在首位。对该畸形的治疗手段目前仅限于患者出生后的手术修补,术后仍然不能完全恢复患者语音功能,并影响以后牙齿萌出、排列和患者的心理健康。先天性腭裂属于多基因遗传性疾病,有许多基因协同作用参与疾病的发生。如能明确腭裂的发生机制,制定相应预防及早期诊断措施,将会有效预防腭裂畸形的发生。因此,有众多学者长期致力于腭裂畸形发生,机制的研究,试图揭示人类腭裂发生的秘密。本研究利用分子生物学的消减杂交技术,直接提取对照组和腭裂组小鼠发育形成期腭突组织中的mRNA,对两者之间差异表达的基因进行克隆和筛选,获得一系列与腭裂发生相关的基因,并初步探讨了相关基因的染色体定位、结构及作用。研究主要分为以下3部分内容一.RA诱导的MSX-1基因在腭突间充质细胞中表达变化的研究取妊娠12天CS7BL/6N系孕鼠  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

东南大学
东南大学

心脏间充质细胞外泌体对缺血性心血管病模型的作用及其意义

第一部分Sac-1+心脏间充质细胞来源的外泌体的分离和鉴定目的:分离、纯化Sca-1+心脏间充质细胞来源的外泌体,并进行鉴定。方法:取野生型的C57BL/6小鼠的心脏,用两步法获得Sca-1+心脏间充质细胞。先用磁珠分选去除含有造血细胞表面标记的细胞,再用Sca-1标记的磁珠进行二次分选获得Sca-1+心脏间充质细胞(CMCs)。通过流式细胞学分析CMCs的表面抗原如CD105、CD44、CD140和c-kit,同时应用免疫荧光染色分析细胞GATA4和Ki67的表达。使用去除外泌体的含有10%FBS的培养基培养CMCs48小时,收集培养液,经沉淀法获得外泌体。使用免疫电镜和纳米颗粒示踪分析法对所得外泌体进行鉴定,进一步提取外泌体蛋白,通过Western blot检测CD63、CD81和Tsg101等在外泌体蛋白中的表达。结果:经上述方法获得Sca-1+心脏间充质细胞,经流式细胞学分析发现细胞CD105+、CD44+、CD140+...  (本文共117页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

SND1通过激活SLUG表达促进SKOV3细胞上皮间充质转化(EMT)

研究目的:肿瘤的转移是一个错综复杂的过程,不同信号通路和多种调控分子在其中交互影响,彼此发挥不可替代的作用。这种生物学行为的发生是由肿瘤细胞形态伴随分子特性向间充质表型转化所导致的,在细胞获得了间充质特性后会更容易迁移和侵袭至其他身体部位,此过程称为上皮向间充质转化(Epithelia-Mesenchymal Transition)过程,简称EMT。而当肿瘤细胞抵达所种植部位开始增殖逐渐形成第二病灶时,细胞又会从转移性强的间充质特性重新恢复成上皮特性,此时称简直上皮转化(Mesenchymal-epithelial Transition,MET)。SND1蛋白作为一种多功能蛋白在细胞内广泛表达,现已证实可作为一种癌症相关分子参与多种实体肿瘤的发生,同时对肿瘤转移起到促进作用。本实验室前期结果显示,在乳腺癌细胞中SND1蛋白与TGFβ信号通路相互作用共同促进肿瘤转移的发生;而在卵巢组织切片中我们发现与卵巢囊腺瘤样本相比,SND1蛋...  (本文共128页) 本文目录 | 阅读全文>>

武汉大学
武汉大学

二甲基丙烯酸羟乙酯对牙髓间充质细胞的毒性作用及机制研究

牙髓间充质细胞(Dental Mesenchymal cells)是牙髓组织中具有多向分化能力的细胞,可应对许多损伤反应,如迁移至龋病损伤区域,形成修复性牙本质抵御外界刺激。因此,任何干扰人牙髓间充质细胞细胞活性的临床操作都可能引起牙髓组织内稳态的严重改变。复合树脂材料因其具有美观、简易操作及安全性能等,近来成为牙科充填治疗和粘结修复的主要生物材料。二甲基丙烯酸羟乙酯(2-Hydroxyethyl methacrylate,HEMA)是复合树脂材料基质中主要的单体成分,是一种中性亲水单体。HEMA具有其亲水性和低分子量等特征,通过与水竞争,浸润、渗透入牙本质有机基质网中,促进树脂流动和分散,有效增强树脂与牙本质的结合强度。其特性同时也使HEMA在牙科治疗过程中,易于从未聚合完全的树脂中游离出来,通过牙本质小管扩散至口腔组织中,引起组织细胞毒性反应。然而,HEMA对牙髓间充质细胞的毒性作用机制仍未被阐明。细胞自噬(Autophag...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军海军军医大学
中国人民解放军海军军医大学

TIP30对HNSCC上皮细胞间充质化调控及机制的研究

序言:如何应对恶性肿瘤的局部淋巴结及远处转移始终是一个世界性的难题,尤其是转移复发率高的头颈鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)。HNSCC属于上皮来源的肿瘤细胞,转移前先要发生上皮细胞间充质转换(epithelia mesenchymal transition,EMT),使其得以自基底膜脱落,并可以在组织间游走,且更具侵袭性。如果能详细了解EMT的机制,并加以阻断,或许能将肿瘤的转移遏制在早期。TIP30是一种抑癌基因,与抑制肿瘤转移有关。在多种肿瘤中均发现可以抑制肿瘤的转移。以往研究发现TIP30可与Snail竞争性结合核转运因子importin-β,抑制Snail入核从而抑制肿瘤细胞的EMT。同时我们也发现,在喉癌细胞中TIP30的表达变化不仅影响了Snail的入核,也改变了其蛋白稳定性,过表达TIP30可致使Snail蛋白的降解效率显著增快。所以我们认为TI...  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

VIP在前列腺癌PC-3、DU145细胞中增殖、血管生成及上皮—间充质转化的研究

目的通过细胞培养、动物实验等实验方法,利用CCK-8、PCR、Westernblot、Transwell小室等技术手段,探讨血管活性肠肽(VIP)在前列腺癌PC-3、DU145中增殖、血管生成、上皮-间充质转化的作用机制。方法用浓度分别为0、25、50、100μmol/L的VIP处理PC-3、DU145前列腺癌细胞,CCK-8法检测24、48、72h时PC-3细胞增殖能力的变化,PCR、Westernblot检测PC-3细胞Cyclin D1、bcl-2、MMP-9 m RNA和蛋白的表达;构建经100nmol/l VIP处理的裸鼠PC-3模型,测量移植瘤的体积和VEGF m RNA及微血管密度的变化;划痕实验和Transwell小室检测DU145细胞运动、迁移,PCR、Westernblot检测DU145细胞中上皮-间充质转化的指标E-cadherin、Vimentin、Snail m RNA和蛋白的变化。结果经不同浓度VIP...  (本文共74页) 本文目录 | 阅读全文>>