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结核分枝杆菌lhp-esat6融合基因原核表达载体的构建及重组CFP10-ESAT6融合蛋白的初步应用

本研究通过体外扩增MTB esat6、lhp及lhp-esat6融合基因,构建原核表达载体并在E.coli中表达,然后鉴定、分离及纯化重组蛋白。用动物试验和临床病例评价rCFP10-ESAT6融合蛋白在MTB感染免疫学诊断中的价值。第一部分 结核分枝杆菌esat6基因原核表达载体的构建及表达目的:构建MTB esat6基因原核表达质粒,在E.coli中表达并用亲合层析法纯化rESAT6蛋白。方法:以一对分别带有HindⅢ和BamHI酶切位点的引物,以MTB基因组为模板,用PCR法扩增MTB esat6基因,并将其克隆入pQE30质粒。测序正确后,再亚克隆入pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体。用重组体分别转化DH5α和BL21(DE3)菌,在IPTG诱导下进行表达。表达产物经SDS-PAGE鉴定,再经Ni-NTA柱纯化,并用活动性结核患者血清以Western-blot法鉴定其  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

《西部医学》2008年04期
西部医学

重组融合蛋白CFP10-ESAT6在结核病血清学诊断中的初步应用

目的探讨结核分枝杆菌重组融合蛋白CFP 10-ESAT 6用于结核病血清学诊断的价值。方法分别用CFP 10-ESAT 6、ESAT 6和PPD检测220例确诊的结核病患者血清、30例非结核病呼吸系统疾病患者血清和50例健康人血...  (本文共3页) 阅读全文>>

湖南农业大学
湖南农业大学

检测结核分枝杆菌CFP10-ESAT6分泌蛋白的方法建立和应用研究

目前在人类和动物的传染病中,结核病仍是危害人畜健康的最严重的传染性疾病。结核病的诊断技术主要有细菌学,免疫学和分子生物学三种诊断方法,其中细菌学检查仍然是结核病实验室诊断的金标准。但该法涂片阳性率低,细菌培养费时间;分子生物学检查虽然快速,灵敏,但操作烦琐,技术要求高,难以广泛运用。免疫学检查的诊断价值虽然不如细菌学检查,但具有简便,快速,又有一定的敏感性和特异性,因此不失为结核病有效诊断的辅助方法。近年来,人们对结核分枝杆菌(MTB)培养的滤液进行了深入的研究,分离出了多种分泌蛋白,如MPT64、PT70、MPT63、MPT53、Ag85、CPF10、ESAT6等。其中的CFP10、ESAT6具有良好的免疫原性,而且为结核分枝杆菌和牛结核分枝杆菌所特有,BCG及非致病分枝杆菌缺乏。因此这两种蛋白有利于区别是否是卡介苗接种过的病畜,是许多研究人员所研究的对象。本研究以结核分枝杆菌标准株H37Rv的基因组DNA为模板,经重叠PCR...  (本文共60页) 本文目录 | 阅读全文>>

《黑龙江畜牧兽医》2014年17期
黑龙江畜牧兽医

牛分枝杆菌CFP10-ESAT6融合基因的表达纯化

为了提高牛分枝杆菌单一抗原的抗原性,试验采用重叠延伸剪接技术(SOE)将CFP10和ESAT6基因通过(Gly4Ser)3接头连接,得到融合基因CFP10-ESAT6;将其克隆入pGEX-6P-1质粒,构建重组质粒pGEX-6P-1-CFP10-ES...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国兽医科学》2009年09期
中国兽医科学

牛结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的原核表达及其在牛结核病检测中的应用

采用重组PCR技术从牛结核分枝杆菌AN5基因组DNA中扩增CFP10-ESAT6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a,构建了原核表达质粒pET-CFP10/ESAT6。重组子经酶切及测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳鉴定...  (本文共7页) 阅读全文>>

《中国热带医学》2009年05期
中国热带医学

分泌性表达融合蛋白CFP10-ESAT6重组卡介苗构建研究

目的构建分泌表达融合蛋白CFP10-ESAT6的重组卡介苗。方法采用基因拼接(Gene SOEing)法,体外扩增结核杆菌CFP10-ESAT6融合基因,插入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pBCG3000,构建重组穿梭表达质粒pBCG3000-CFP10-ESAT6,用电穿孔法将pBCG3000-CFP...  (本文共4页) 阅读全文>>