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人骨形态发生蛋白4成熟肽DNA序列的克隆与表达

BMP-4(bone morphogenetic protein 4)是转化生长因子β(TGF-β)超家族成员之一,具有促进软骨和骨组织形成的作用,在治疗骨折和骨缺损等方面具有极大的临床应用价值。因此本研究利用基因工程生产人BMP-4成熟肽。采用细胞裂解液法自毛发提取基因组DNA,通过PCR法扩增出编码人骨形态发生蛋白4(BMP-4)成熟肽的DNA序列,克隆到载体pUCm-T中。在此基础上,将编码人骨形态发生蛋白4(BMP-4)成熟肽的基因片段分别克隆到pBV220、pGEX-3X和pET42a载体上进行原核表达,并且克隆到pIC9酵母分泌型表达载体上,为BMP-4的真核表达奠定基础。重组的表达载体pBV220/hBMP-4转化到大肠杆菌DH5α中诱导表达。经条件优化后,非融合蛋白产量为29.7mg/L培养基,主要存在于包涵体中,包涵体溶解复性后占包涵体总蛋白的85.5%,占菌体总蛋白的17.4%。经Westernblottin  (本文共135页) 本文目录 | 阅读全文>>

《畜牧兽医学报》2012年08期
畜牧兽医学报

重组牦牛肌肉生长抑制素成熟肽的纯化及其免疫原性研究

为了探索牦牛MSTN的作用机制,寻找合适的阻断MSTN活性的方法,最终实现牦牛的高效率育肥,本研究采用RT-PCR方法克隆牦牛MSTN成熟肽基因,构建MSTN-pET28a(+)重组表达载体,进而在E.coliBL21(DE3)宿主菌中进行表达,将表达产物用亲和层析纯化,最后用ELISA方法检测牦牛MSTN重组成熟肽的免疫原性。重组载体中连接的牦牛MSTN成熟肽...  (本文共5页) 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

藏猪IGF-1成熟肽cDNA的克隆表达及活性分析

类胰岛素生长因子-1(Insulin-like growth factor 1,IGF-1)是从动物血清中发现的一种能调控动物机体生长、发育和代谢的一个重要因子,不仅可以促进细胞对氨基酸和葡萄糖的摄取,增加蛋白、脂肪和糖原等的合成,还能刺激DNA复制、细胞增殖分化,刺激性腺分泌性激素,促进泌乳及新生动物小肠发育。猪血浆中IGF-1水平与体重及增重呈正相关,IGF-1基因可以作为影响动物生长发育的候选基因。目前尚无关于藏猪IGF-1表达的报道,本文首次对藏猪IGF-1成熟肽基因进行克隆,构建IGF-1成熟肽的原核表达载体pET-32a-IGF-1和真核表达载体pPIC9K-IGF-1,实现其在大肠杆菌BL21(DE3)和毕赤酵母GS115中的表达,为进一步研究藏猪IGF-1成熟肽的生物学功能及在藏猪生长发育过程中的调节作用提供参考。1.IGF-1基因全长序列的扩增及生物信息学分析根据GenBank中猪IGF-1基因序列(登录号:D...  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

《牙体牙髓牙周病学杂志》2001年02期
牙体牙髓牙周病学杂志

人牙髓细胞骨涎蛋白成熟肽基因克隆和序列分析

目的 :证实人牙髓细胞中骨涎蛋白 (Bonesialoprotein ,BSP)的表达 ,获得BSP成熟肽基因。方法 :体外培养人牙髓细胞 ,提取人牙髓细胞总RNA ,反转录合成cDNA ,以特异性引物扩增BSP成熟肽基...  (本文共3页) 阅读全文>>

东南大学
东南大学

先天性小耳畸形患者骨形态发生蛋白-5成熟肽基因突变研究

目的探讨骨形态发生蛋白-5(bone morphogenetic protein-5, BMP5)成熟肽基因突变与先天性小耳畸形(microtia)发病的关系。方法收集临床确诊的散发的先天性小耳畸形患者35例,用Trizol提取外周血白细胞总RNA,利用反转录-聚合酶链反应-单链构象多态性分析(reverse transcriptase -polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism , RT-PCR-SSCP)技术进行BMP5成熟肽基因的突变分析,对异常电泳条带的RT-PCR产物进行核苷酸序列测定,明确突变位点和方式。结果用单链构象多态性分析技术从35例先天性小耳畸形患者中检测到一例杂合子突变,随后的DNA测序结果为第196位点发生TTT→ACA突变,使原来的苯丙氨酸突变为苏氨酸,这是一种错义突变,突变检出率为2.9%。结论检测到的BMP5成...  (本文共44页) 本文目录 | 阅读全文>>

《扬州大学学报(农业与生命科学版)》2013年01期
扬州大学学报(农业与生命科学版)

鸡α-干扰素成熟肽的原核表达及其多价血清的制备

以PCR方法从活化的鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素的成熟肽基因序列,构建原核表达质粒pET32a-α和pGEX6p-α;SDS-PAGE及Western blotting法检测两载体特异性表达成熟肽;将纯化的pET3...  (本文共5页) 阅读全文>>