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枯草芽孢杆菌植酸酶phyC基因的克隆及其表达研究

植酸酶作为一种绿色添加剂,已日益广泛使用于饲料工业中。研究表明,来源于芽孢杆菌的植酸酶属于中性植酸酶不仅具有较好的热稳定性,有助于抵抗饲料制粒或者膨化过程中引起的酶失活,而且其酶促反应的pH有效作用范围在6.5~7.5之间,适合用于消化道呈中性的鲤科鱼类,以及在单胃动物中pH值呈中性的肠道段中表现酶活力。目前,国内外尚无商品化的中性植酸酶投入市场。本研究从已筛选获得的中性植酸酶产酶菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) WHNB02出发,根据GenBank上的芽孢杆菌,phyC基因序列设计了一对引物,采用PCR法获得芽孢杆菌植酸酶的全长phyC基因,并将其克隆到pUC18-T载体。序列分析表明,该基因全长1152bp,编码一个383氨基酸的多肽。通过与GenBank中登录的其他6个植酸酶基因的核酸序列和氨基酸序列进行比较,建立了系统进化树,结果表明:所有芽孢杆菌植酸酶具有较高的同源性,来源于7株芽孢杆菌的植酸酶在  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物技术》2004年03期
生物技术

Bacillus subtilis WHNB02植酸酶phyC基因的克隆及序列分析

采用PCR法获得产植酸酶芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)WHNB0 2株植酸酶的全长phyC基因 ,并将其克隆到pUC18-T载体。序列分析表明该基因全长 115 2bp ,编码一个 38...  (本文共3页) 阅读全文>>

《蚕业科学》2014年05期
蚕业科学

花粉管通道和农杆菌介导植酸酶基因phyC对桑树的遗传转化

植酸酶可以促进单胃动物利用饲料中的植酸磷。桑叶中的含磷量较高,培育转植酸酶基因的桑树品种有利于桑叶饲料的开发利用。构建含中性植酸酶基因phyC的植物表达载体pCAMBIA-2300-phyC,利用花...  (本文共7页) 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

优化设计的植酸酶phyC基因及phyA~m-phyCs基因在毕赤巴斯德酵母中的表达研究

植酸酶作为畜禽及水产等动物的一种绿色饲料添加剂,已日益广泛使用于饲料工业中,其使用效果已在世界范围内得到了确证。根据其最适pH值,植酸酶主要分为酸性(EC3.1.3.8,phyA基因编码)及中性植酸酶(EC3.1.3.26,phyC基因编码)。其中来源于真菌的酸性植酸酶,其酶促反应的pH有效作用范围在2.5~5.5之间,目前,以对真菌来源的酸性植酸酶研究最多,并进行了规模化发酵生产。而中性植酸酶其酶促反应的pH有效作用范围在6~9之间,由于研究较少,产酶量较低等原因的尚无商品投入市场。而对于融合植酸酶的研究也未见报道。为提高中性植酸酶的产量,本论文首次优化设计了中性植酸酶phyC基因,获得了优化设计的phyCs基因,并现实了其在毕赤巴斯德酵母的表达;为拓宽植酸酶的pH作用范围,降低生产成本,本研究创造性地将酸性植酸酶phyA~m及中性植酸酶phyCs基因融合连接,并首次现实了融合基因phyA~m-phyCs在毕赤巴斯德酵母的表达...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因在大肠杆菌中的表达及玉米表达载体的构建

本研究以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)WHNB02中性植酸酶phyC基因为目的基因(GenBank Accession No.AY220075),在成熟肽序列之前设计上游引物,在终止密码子处设计下游引物(引入BamHⅠ/SalⅠ)。用含高保真度的聚合酶TaqPlus进行扩增,得到了大小约1.1kb的单一条带产物,获得phyC基因表达片段,将该产物与pUC18-T载体进行连接,酶切鉴定后,经BamHⅠ和SalⅠ酶切回收处理phyC片段,连接到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌JM109,在含100μg/ml的Amp抗性的LB平板上筛选后,经菌落PCR及酶切鉴定,获得阳性克隆菌株。用终浓度为0.1mM IPTG在含100μg/ml的Amp抗性的LB中诱导表达,酶活测定结果表明,表达产物具有植酸酶活性。SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带,相对分子量(Mr)为69kD,30℃诱导3h后,...  (本文共49页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物技术》2004年03期
生物技术

植酸酶phyC基因表达载体的构建及其在E.coli中的表达

以phyC -PUC18-T为模板 ,扩增出枯草芽孢杆菌中性植酸酶phyC基因 ,克隆至T载体中 ,经酶切鉴定及序列测定后重组入谷胱甘肽S -转移酶融合表达载体pGEX - 4T - 1中 ,转化大肠杆菌JM10 9,...  (本文共4页) 阅读全文>>