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植物基因安全转化体系关键技术的研究

转基因植物安全性问题一直是各界关注的问题,本研究利用分子生物学技术优化改造传统的植物表达载体,以获得无选择标记基因、无目的基因和无目的蛋白的转基因产品,从而减轻转基因植物带来的安全性问题。利用PCR方法扩增玉米乙酰苯胺类化合物诱导启动子(In5-2启动子),并与GUS基因相连构建植物表达载体,转化烟草获得转基因烟草植株。在不同诱导时间和不同佐剂浓度条件下,对转基因烟草的GUS活性进行分析。结果表明,诱导剂的存在与GUS基因的表达呈正相关,且随着诱导时间的延长和佐剂浓度的增加,GUS活性均呈增长的趋势。利用PCR技术获得6个不同长度的玉米In5-2启动子5′端缺失片段,分别克隆到植物表达载体p1301中构建一系列植物表达载体,转化烟草获得转基因植株。GUS活性定量检测结果显示,玉米In5-2启动子的核心功能区可能位于ATG上游-1520至-1431bp之间。利用DNAMAN软件分析,在-1108至-1079bp和-891至-864  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

《江苏农业科学》2013年12期
江苏农业科学

狂犬病病毒N基因植物表达载体的构建

以提取的狂犬病病毒总RNA为模板,以N1和N2为引物,反转录为cDNA,然后再以cDNA为模板进行PCR扩增,将PCR产物克隆至质粒p...  (本文共2页) 阅读全文>>

河北大学
河北大学

HaCDA hpRNA植物表达载体的构建和烟草的遗传转化分析

RNAi是一种基因沉默技术,可引起细胞内同源的mRNA发生降解,普遍存在于真核生物中。通过基因工程技术构建昆虫关键基因的dsRNA片段导入受体植物可显著提高植物的抗虫性。棉铃虫(Helicoverpa armigera)是一种全球广泛存在的农业害虫。本论文以4个棉铃虫CDA基因为研究对象,分别构建到hpRNA植物表达载体上,利用农杆菌介导法将其转化烟草,获得具有卡那霉素抗性的植株。随之对抗性植株进行PCR和RT-PCR鉴定以及T1代转基因烟草植株发芽率进行卡方检验。最后挑选单拷贝的T0代植株叶片进行抗虫性实验研究。具体研究内容以及结果如下:1、构建含有目的基因CDA的hpRNA植物表达载体以本实验室已有的pUCm-HaCDA质粒作模板进行PCR扩增获得片段大小均在500~650bp之间的4个棉铃虫CDA基因片段。利用TA克隆法将其分别连接到中间载体pUCBXK质粒上。之后用Golden-gate克隆法将正向连接的目的基因片段构建...  (本文共52页) 本文目录 | 阅读全文>>

牡丹江师范学院
牡丹江师范学院

败育型植物表达载体的构建及功能验证

败育问题是植物界研究热点之一,在作物常规育种及生产制种方面有着广泛应用,运用败育型植物表达载体遗传转化是引发植物不育的一种快捷策略。本文分别克隆了拟南芥花分生组织及花器官特异基因AP1的启动子和大肠杆菌RNaseH基因的编码区,构建了败育型植物表达载体pHZM13-AP1-RNaseH,并通过电击法将其导入农杆菌EHA105。以烟草C151为受体材料,经农杆菌介导遗传转化,共获得转化株35株。花粉管萌发试验表明,转化株花粉同对照间萌发活力并无差别;称取种子百粒重,转化株平均为6.6mg,对照株平均为9.1mg,表明二者差别显著。进一步电镜扫描种子表面,发现转化株种皮表面褶皱状纹饰减少,成因不明。种子萌发试验表明,转化株种子发率较低,且表现萌发延迟。本研究表明,该败育型植物表达载体极度削弱了宿主植物的育性,但自杀基因并未影响花器发生,这可能同所用启动子在异源表达背景下作用活性改变有关。  (本文共46页) 本文目录 | 阅读全文>>

新疆农业大学
新疆农业大学

GbWOX9基因植物表达载体的构建及对海岛棉胚性细胞的遗传转化

植物分生组织的干细胞是植物形态建成、器官持续再生的关键。WUS/WOX家族成员在植物分生组织的干细胞中特异表达,在植物器官发育过程中以及细胞类型转变中发挥着重要作用。本研究以海岛棉“新海16”为材料,克隆WOX/WUS转录因子家族的成员中与植物胚胎发育相关的基因GbWOX9,并对其进行结构预测分析、亚细胞定位预测、同源进化分析及不同体细胞胚阶段的表达分析,同时,构建化学诱导型的GbWOX9正、反义植物表达载体,借助农杆菌介导的遗传转化方法将GbWOX9基因导入到“新海16”的正、反义胚性细胞中并对其在不同诱导剂浓度处理过的细胞组织的表达模式进行分析。主要研究结果如下:1.利用PCR技术对GbWOX9基因进行克隆,借助相关的在线软件及DANMAN、MEGA5等对该基因进行生物信息学分析,结果表明该基因包括1038 bp的开放阅读框,编码345个氨基酸,在线预测其蛋白分子量约为38.26 kD,等电点为6.7。通过氨基酸序列比对发现...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
华中农业大学

亚洲镰刀菌二型肌球蛋白合成基因RNAi片段功能鉴定与植物表达载体的构建

小麦是世界上重要的粮食作物之一。由亚洲镰刀菌引起的小麦赤霉病(Fusariu m Head Blight,FHB),在我国的发病面积大、危害重,赤霉病流行不仅引起小麦减产甚至绝产,还产生大量危害人畜健康的毒素,影响食品安全。由于小麦赤霉病天然抗病资源匮乏,抗赤霉病小麦品种培育进展缓慢,因此筛选鉴定抗赤霉病新资源,对于培育抗赤霉病新品种具有重要意义。本研究采取Gateway方法构建了不同亚洲镰刀菌关键生长基因的真菌表达载体,通过RNAi在转录后水平抑制靶基因的表达,筛选能抑制赤霉菌生长发育的片段;并构建了小麦表达载体,为培育抗赤霉病小麦品种提供新材料和依据。1.亚洲镰刀菌二型肌球蛋白合成基因(My2)RNAi片段的分析与鉴定。将Myo 2基因的编码区域共分为15个片段,通过引物将各个片段扩增,并在两端加上attB1/attB2位点。利用BP重组酶与中间载体pDON-201(含有attP1/attP2位点)进行重组,获得BP入门载体...  (本文共65页) 本文目录 | 阅读全文>>