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转染VEGF基因的骨骼肌成肌细胞移植结合左心室成形术治疗缺血性心脏病晚期充血性心力衰竭的实验研究

目的:研究转染VEGF基因的骨骼肌成肌细胞移植结合左心室成形术对缺血性心脏病晚期充血性心力衰竭的协同治疗作用,为终末期心衰提供一种新的治疗策略。方法:胶原酶、胰酶二步酶消化+差速贴壁法分离大鼠骨骼肌成肌细胞,体外培养扩增;体外实验研究Ad.VEGF_(165)转染成肌细胞的效率、蛋白表达、蛋白功能及对成肌细胞增殖、分化的影响作用;建立心梗后充血性心力衰竭左心室成形术的大鼠模型;将60只心梗后4周形成中等大小室壁瘤(占左室面积20-40%)的大鼠随机分成5组(每组12只),组Ⅰ-Ⅳ再次开胸行左心室成形术,同期行以下处理:组Ⅰ在缝缩部位边缘注射转染Ad.VEGF_(165)的成肌细胞;组Ⅱ以同样方法注射成肌细胞;组Ⅲ注射Ad.VEGF_(165);组Ⅳ注射PBS;组Ⅴ不进行左室成形,开胸后仅在梗死区边缘注射转染Ad.VEGF_(165)的成肌细胞。所有实验动物第二次术后继续观察4周。心脏超声及血流动力学检测评价心脏大小及功能,免疫组  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

武汉大学
武汉大学

血管紧张素Ⅱ受体反义核酸转染心肌细胞的研究

背景:越来越多的证据表明,肾素-血管紧张素-醛固酮系统(Rennin angiotensin aldosterone system,RAS)过度活跃在多种心血管疾病的发生、发展中发挥重要作用。目前在临床上广为应用的血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素Ⅲ受体1(angiotensin Ⅱ receptor 1,AT_1)拮抗剂能有效地抑制RAS,降低和控制血压,并且对靶器官有良好的保护作用。但它们也有一些不足之处,如药物的有效作用时间相对较短(≤24h),特异性相对较差,长期服用有一定的副作用,常因病人长期服药的依从性差而影响降压效应,尤其是那些无症状患者。据报道,到目前为止也只有20%~35%的病人血压得到了真正的控制。随着近年来分子生物学理论与技术的发展,特别是在靶基因界定和载体构建方面取得的重大进展,高血压的基因治疗成为新的探索。反义寡核苷酸(antisense oligonuleotides,AS-ODNs)技术...  (本文共82页) 本文目录 | 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

MicroRNA Let-7f参与胰腺癌侵袭与迁移的相关性研究

目的观察MicroRNA Let-7f对胰腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭与迁移等生物学行为的影响,初步探讨Let-7f在胰腺癌发生发展中的作用及其可能机制,为临床胰腺癌的早期诊断及抗癌药物的开发提供新的靶点和实验依据。方法1、采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)的方法检测Let-7 mi RNAs在正常胰腺细胞株HPDE6C7及胰腺癌细胞株PANC-1和Bx-PC3中的表达差异。2、分别运用功能获得性实验和功能缺失性实验将Let-7f模拟物和抑制物转染至胰腺癌PANC-1和Bx-PC3细胞中,RT-qPCR法检测转染后Let-7f在细胞中的表达变化情况。采用CCK-8法检测改变细胞内Let-7f表达对细胞增殖的作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测Let-7f表达变化对细胞凋亡的影...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所)
中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所)

纳米尺寸效应和转导方式对基因转染的影响

基因治疗是将核酸药物输送至靶细胞,进而表达所需的基因产物(核酸或蛋白质),取代或者矫正患者的缺陷基因功能,达到治疗目的。因其具有高疗效、低毒副作用的优点,已成为肿瘤等基因类疾病的潜在治疗方法之一。基因输送方法主要包括病毒载体输送、非病毒载体输送和物理输送。与病毒载体相比,非病毒载体,具有低免疫原性、易实现规模化生产和制备、便于修饰等优势。但是非病毒载体的体内递送基因效率较低,限制了其临床转化。即使是被广泛研究的阳离子聚合物(即聚乙烯亚胺(PEI)),仍然存在很多未被阐明的递送机制。由于实验条件和操作的巨大差异,文献报道中经常出现相互矛盾的转染结果。所以,在纳米复合物制备过程中,需要对一些关键参数进行识别和严格控制。制备工艺参数(如浓度或者混合物体积)对纳米粒结构的影响及其对基因转染的影响,目前对这些方面的了解仍不多。本课题考察了不同浓度(或反应体积)对PEI/DNA复合物的纳米特性的影响,发现在高浓度(或小反应体积)条件下制备,...  (本文共126页) 本文目录 | 阅读全文>>

内蒙古医科大学
内蒙古医科大学

兔S100A6基因表达载体构建、鉴定、转染及其对神经细胞增殖影响的研究

目的:利用分子生物学方法获取兔的Soluble-100A6(S100A6)蛋白的基因并构建其质粒表达载体,采用脂质体介导转染技术分别将目的基因表达载体和空载体转染入雪旺细胞(Schwann Cells,SCs)中,鉴定兔S100A6基因表达载体,研究S100A6蛋白在SCs中的表达情况及其对SCs增殖的影响。方法:取家兔坐骨神经,提取SCs并培养;构建S100A6基因表达载体质粒,对质粒进行相关验证、鉴定,采用脂质体介导转染技术分别将S100A6蛋白c DNA质粒表达载体与空载质粒转染入SCs中,即:A组:S100A6c DNA+SCs;B组:空白载体+SCs。转染成功后采用蛋白印迹法(Western Blot检测S100A6蛋白在SCs中的表达,分析两组S100A6蛋白表达量的变化;同时,采用免疫细胞化学检测两组SCs增殖情况。结果:1、经凝胶电泳及PIRES2-EGFP-S100A6双切酶验证,初步鉴定S100A6质粒构建成...  (本文共41页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

慢病毒介导Fas-siRNA和Sox9转染兔退变髓核细胞的体内实验研究

目的:通过慢病毒介导Fas-si RNA和Sox9体内转染兔退变髓核细胞,观察单基因转染与双基因联合转染对退变椎间盘的生物学效应。研究方法:将健康成年新西兰大白兔随机分为5组:A.PBS组,B.空病毒组,C.Fas-si RNA组,D.Sox9组,E.双基因组;针刺椎间盘建立新西兰大白兔退变椎间盘模型,使用微量注射器分别向5组实验兔椎间盘内注入20μL的PBS磷酸盐缓冲液、慢病毒、r LV-h Fas-sh RNA、r LV-h Sox9、r LV-h Fas-sh RNA+r LV-h Sox9;转染后第8周、12周、24周分别对实验动物进行MRI扫描观察其椎间盘信号变化。然后处死实验动物,取出退变椎间盘,应用Western-Blot技术检测椎间盘内II型胶原、蛋白多糖水平,应用RT-PCR技术检测Fasm RNA和Sox9 m RNA表达水平。结果:转染后第8周、12周、24周对实验动物行MRI扫描,观察椎间盘MRI T2加...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>