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CHO-dhfr细胞改造的研究

CHO-dhfr~-细胞表达体系是重要的药用蛋白表达体系,但其在培养过程中存在着一系列的问题,为了使其具有更适应大规模培养的特性,我们利用Flp定点整合系统,通过在CHO-dhfr~-细胞中稳定整合调控基因对CHO-dhfr~-细胞进行了的改造。首先在CHO-dhfr~-细胞中定点整合并过表达人抗凋亡基因Bc1-2,获得的重组细胞对诱导凋亡因素的耐受能力增强,凋亡水平降低,增加了对无血清和高氨离子浓度不利培养条件。乳酸是细胞的重要代谢产物,其积累可明显影响细胞的生长和对外源蛋白的表达。为了减少细胞内乳酸的积累,选择了四个CHO-dhfr~-细胞LDH-A基因中RNAi位点,设计了可转录产生相应shRNA片段的DNA序列,克隆于表达载体pAV/U6的下游。通过将shRNA表达载体在CHO-dhfr~-细胞中稳定整合使之持续表达针对CHO-dhfr细胞LDH-A基因的shRNA,在建立的四株重组细胞中,筛选到一株具有较低的乳酸脱氢酶  (本文共68页) 本文目录 | 阅读全文>>

《第二军医大学学报》1980年60期
第二军医大学学报

重组人促红细胞生成素cDNA在CHO-dhfr~-细胞中的高效表达

目的:使重组人促红细胞生成素(rhEPO)在CHO细胞中获得高效表达。方法:利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素cDNA重组表达质粒pED-EPO和pEF-EPO,分别用DEAE-dextran法转染COS7细胞,作瞬时高表达,选pEF-EPO用磷酸钙共沉淀法转染CHO-...  (本文共3;页) 阅读全文>>

《细胞与分子免疫学杂志》2009年11期
细胞与分子免疫学杂志

截短型人骨保护素在CHO-DHFR~-细胞中的表达及活性测定

目的:构建截短型人骨保护素(hTOPG)哺乳动物表达载体pcDNA3.1/DHFR-hTOPG,实现其在CHO-DHFR-细胞中的高效表达,获取生物活性较高的重组蛋白。方法:利用基因重组技术构建重组表达载体pcDNA3.1/DHFR-TOPG,按LipofectamineTM2000试剂盒说明书转染...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中华实验和临床病毒学杂志》2001年03期
中华实验和临床病毒学杂志

乙型肝炎表面S+前S1融合基因转化CHO-dhfr~-的细胞染色体变化及致瘤性

目的 了解乙型肝炎病毒表面S +前S1融合重组DNA(乙型肝炎重组DNA)整合到中国地鼠卵巢细胞二氢叶酸还原酶阴性突变株细胞 (CHOdhfr- )染色体的变化及致瘤性。方法 应用分子克隆技术构建含HBsAg的表面抗原S +前S1基因的质粒经转染、克隆、加压 (MTX和MSX)筛选出高效表达乙型肝炎表面S +S1融合抗原的转基因细胞株 (GdSS1 18)进行染色体制片 ,同时将制备的细胞、细...  (本文共4页) 阅读全文>>

《细胞与分子免疫学杂志》2003年03期
细胞与分子免疫学杂志

GPI-CTLA4Ig嵌合分子的构建和在CHO-dhfr~-细胞膜上的表达

目的 :研制GPI锚定修饰的新型免疫抑制分子GPI CT LA4Ig。方法 :通过将从促衰变因子 (DAF)来源的GPI修饰性信号序列与CTLA4Ig嵌合 ,获得GPI修饰的CTLA4Ig分子。将编码GPI CTLA4Ig嵌合分子的基因克隆到真核表达载体pCI d...  (本文共3页) 阅读全文>>