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基因突变技术提高phyA植酸酶在毕赤酵母中表达量及热稳定性的研究

植酸酶作为单胃动物的饲料添加剂,其使用效果已在世界范围内得到了确证。但是,目前植酸酶在饲料中的推广和应用还相当有限,主要原因在于:(1)植酸酶基因工程菌的产酶量有待进一步提高;(2)植酸酶的热稳定性欠佳不能完全满足饲料加工、贮藏的要求。目前,蛋白质工程技术已成为修饰和改造天然酶的有效手段,为植酸酶产量的提高和热稳定性的改善开辟了新的途径。本研究在对本课题组已注册的植酸酶phyA基因核苷酸序列及氨基酸序列分析的基础上,通过对phyA基因进行同义突变、定点突变以及结构延伸突变,获得在毕赤酵母中高效表达并且热稳定性良好的植酸酶,其结果主要如下:1、对来源于本课题组自主分离的黑曲霉N25(Aspergillus niger China Strain)的植酸酶基因phyA(GenBank:基因注册号为AF218813,蛋白质序列号为AAF25481)进行PCR介导的定点突变。在不改变其所编码氨基酸条件下,选用毕赤酵母偏爱的密码子对该基因保  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

微生物植酸酶特殊性的研究及其在蛋鸡饲粮中的应用

本研究通过体外试验和动物试验,全面系统地研究了微生物植酸酶的特性及其对不同阶段蛋鸡生产性能的影响。体外试验主要研究温度、pH、饲料加工工艺和贮存时间对植酸酶活性的影响,以及微生物植酸酶对玉米、豆粕、麦麸中植酸磷的降解率。动物试验主要研究植酸酶对育雏、生长和产蛋期海赛克斯商品代蛋鸡生产性能、营养物质利用、血清学指标、胫骨强度、胫骨矿物质沉积和骨组织结构的影响。体外试验表明,微生物植酸酶在37℃条件下,只有一个活性高峰(pH5.0);其活性随温度升高而升高,而且pH与温度对植酸酶的影响存在明显互作,pH6.2时,植酸酶在45℃活性最高,pH5.4和pH4.6时,其最适温度为55℃,不同pH下,植酸酶在最适温度表现出的活性,远大于标准条件下的活性;适当降低溶液pH,植酸酶最适温度提高,可能是较低的pH有利于植酸酶功能性结构的保持。冷制粒和膨化分别使饲料中植酸酶活性下降39.8%和73.2%,粉料、颗粒料和膨化料在贮存2个月后,其中的植...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

大连理工大学
大连理工大学

曲霉植酸酶基因的克隆及其表达研究

植酸酶作为一种单胃动物饲料添加剂,其饲喂效果已经在世界范围内得到确认。但目前植酸酶在饲料中的推广应用还相当有限,究其原因主要有二:一是天然材料中植酸酶含量太低导致植酸酶生产成本过高;二是当前商业植酸酶的热稳定性难以完全满足饲料加工的要求。通过从自然界筛选具备良好饲用酶潜质的植酸酶产生菌,利用分子生物学技术获得植酸酶基因,再将基因高效表达在生物反应器中是解决上述问题的一个策略,业已成为植酸酶的世界性研究热点之一。本研究从土壤中筛选出一株黑曲霉(Aspergillus niger)植酸酶产生菌和一株烟曲霉(Aspergillus fumigatus)植酸酶产生菌,克隆了二者的植酸酶基因,并将其高效表达在毕赤酵母中,获得了性质优良的基因工程植酸酶。另外,本研究将烟曲霉植酸酶成功表达在烟草中,首次利用植物生物反应器生产这类耐热植酸酶,为其今后的生产开辟了一条新途径,同时,鉴于植物基因工程在解决作物有效利用土壤有机磷资源上所具备的潜能,对...  (本文共125页) 本文目录 | 阅读全文>>

《广东饲料》2019年08期
广东饲料

植酸酶抗胃蛋白酶的研究

为了评价几种植酸酶在动物胃中对饲料原料的水解效果,进行了体外酶解试验。共采用10种单一酶制剂(植酸酶):编号1-10号。预试验显示,上述酶有基本相似的最适水解反应参...  (本文共3页) 阅读全文>>

《江苏农业科学》2019年19期
江苏农业科学

4种黏土对饲用植酸酶的吸附特性

通过振荡吸附试验,考察了振荡时间、振荡速度、pH值和黏土添加量等因素下,沸石粉、蒙脱石、酸化凹凸棒土和凹凸棒土对饲用植酸酶的吸附动力学和等温吸附特性。结果表明:饲用植酸酶能够在60 min中内快速吸附,120 min内达到吸附平衡;振荡速度为150...  (本文共6页) 阅读全文>>

《国外畜牧学(猪与禽)》2018年02期
国外畜牧学(猪与禽)

如何使用植酸酶基础值

在单胃动物的饲料中添加微生物型植酸酶已经成为生产中一种标准的方法,而且这种方法已经使用多年。但是,由于可消化磷的含量在不同组成的日粮中差异很大,因此现有的植酸酶基础值并不总是正确的。对于所有的植物性饲料原料来说,其所含的磷...  (本文共2页) 阅读全文>>