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PHA颗粒结合蛋白的表达、结晶与X射线衍射分析

新型生物材料聚羟基脂肪酸酯(简称PHA),被称为“绿色塑料”,是细菌胞内积累的碳源和能源储存物,拥有生物可降解性、生物相容性、压电性等许多天然的优良性能。本研究的主要内容为:基于PHA 颗粒表面结合蛋白对聚酯生物合成起始过程的促进作用和稳定颗粒的功能,分别高效表达和结晶分析了位于聚羟基丁酸羟基己酸共聚酯(PHBHHx)颗粒表面的结合蛋白PhaP_Ah和PHB 颗粒结合蛋白PhaPRe;对高质量的大单晶PhaPAh进行了X 射线衍射分析。研究取得的主要结果: 1. 完成了两个不同种属(Aeromonas hydrophila 4AK4,Ralstonia eutropha H16) 来源的PHA 颗粒表面结合蛋白PhaP_Ah 和PhaP_Re 的原核高效表达、蛋白质纯化与结晶优化实验; 2.获得了高质量的PhaP_Ah蛋白质大单晶,X 射线衍射分辨率达到2.8A|°,晶体空间群为P2_12_12_1,晶胞参数为a =80.8|°  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

昆明理工大学
昆明理工大学

C-Raf激酶及其结合蛋白IRS4在环境相关的肺癌发生中的作用机理研究

肺癌是人类健康的第一大杀手,云南地区的肺癌发生率(四十人/十万人)高达全国平均值(二十一人/十万人)的两倍。非小细胞肺癌约占肺癌的80%,因其化疗不敏感,易转移和易复发的特性,探索非小细胞肺癌的新的早期诊断靶标和寻找个性化治疗靶点成了摆在我们面前的紧迫课题。通常认为肺癌的发生与遗传因素和环境因素相关,研究表明云南宣威地区由于煤烟污染较其他地区严重,造成了肺癌治疗靶点蛋白EGFR及Ras的基因表达异于其他地区,最终导致肺癌发生率的显著上升。不论是环境因素还是遗传因素,必须通过影响细胞内信号传导才能最终导致细胞及组织发生癌变。RAF家族作为EGFR和Ras下游信号分子,是细胞信号传导过程中的关键蛋白,在肿瘤发生中扮演了重要的角色。RAF激酶承接上游癌基因产物RAS接收到的信号,将信号传递给MEK和ERK,磷酸化后的ERK控制着广泛的生物学功能:细胞存活,增殖,迁移,分化及免疫应答等。RAF家族具有三个成员:A-Raf,B-Raf和C...  (本文共154页) 本文目录 | 阅读全文>>

昆明理工大学
昆明理工大学

RAF激酶结合蛋白RUVBL1和HAX1在环境相关的肺癌发生中的作用机理研究

肺癌是全球也是中国发病率和死亡率最高的癌症,它也是云南省的“地方病”。非小细胞肺癌占肺癌总数的80%左右,存在易转移和易复发的特点,且对化疗不敏感。因此探索肺癌,特别是非小细胞肺癌的新的治疗靶点具有重要意义。肺癌是一种与环境高度相关的疾病,它与大气环境,室内环境污染有着密切联系。云南省的宣威和个旧地区因其地方矿产特点及生活习惯等问题,成为肺癌的高发区。肺癌还跟生活习惯,特别是吸烟有重要关系。遗传因素促成了肺癌的人群易感性。因此,肺癌是以环境因素为主,多种因素相互作用最终导致细胞内信号传导等发生异常而产生的癌症。RAF/MEK/ERK属于MAPK通路,它调控着细胞的生长,分化,转移,凋亡等诸多过程。作为该通路的重要节点蛋白RAF激酶在RAF/MEK/ERK通路中发挥重要的作用,RAF家族具有三个成员:A-RAF,B-RAF和C-RAF(RAF1)。B-RAF激酶突变与许多恶性肿瘤高度相关,RAF激酶异常的激活可促进下游ERK磷酸化...  (本文共160页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

基于自组装光交联多肽探针和生物质谱鉴定组蛋白修饰结合蛋白的研究

组蛋白翻译后修饰是表观遗传学的重要组成部分,参与调控基因转录,决定细胞命运,其异常表达往往与人类许多重大疾病的发生、发展密切相关。目前普遍认为,组蛋白修饰发挥功能的重要途径之一是通过招募特异性结合蛋白,进而调控下游的生物学活动,因此组蛋白修饰结合蛋白的鉴定对了解其表观遗传调控有着重要的生物学意义。然而,由于组蛋白修饰是动态变化的、修饰结合蛋白的丰度通常很低、修饰与其结合蛋白间的相互作用力弱且通常是瞬时的,因此人们对组蛋白修饰结合蛋白的了解远远滞后于修饰的研究,这在一定程度上阻碍了人们对修饰,尤其是新修饰的深入认识。本文构建了一种自组装光亲和多肽探针,该探针通过自组装技术同时将多肽和光交联基团连接到纳米金上,以多肽为诱饵,通过光交联反应将弱的非共价作用转化为稳定的共价键,提高结合蛋白的捕获。同时,光交联基团二苯甲酮和纳米金之间以聚乙二醇连接,通过对聚乙二醇长度和量的优化使光交联基团处于更优的空间位置,可以达到更优的光交联效果。在此...  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

厦门大学
厦门大学

质谱分析HepG2细胞中Gab2的结合蛋白

脂肪肝,是慢性肝脏疾病和代谢性障碍发生的最常见原因,已经严重影响到全球人类的身体健康。脂肪肝会从最开始的脂肪变性,到脂肪性肝炎,肝硬化、肝细胞癌以及多种肝外并发症(心血管疾病、其他器官的恶性肿瘤)。Gab2作为信号平台蛋白,介导复杂的蛋白-蛋白相互作用。本实验室前期研究证实油酸和酒精能够诱导Gab2表达增加,并促进Gab2募集PI3K、Shp2或Socs3以及激活它们的下游信号如Akt、Erk和Stat3。故此,Gab2是肝脏疾病的重要相关蛋白,是致病因子诱导脂肪肝的信号整合枢纽。但人们对Gab2具体是如何整合多种信号从而调控脂肪肝的依然知之甚少。本课题进行了3次基于亲和纯化的定性质谱有效实验,分别鉴定到了 621、780、537个蛋白,重复出现的蛋白有408个。这些蛋白中包含23个已知的互作蛋白,以及385个新发现的Gab2结合蛋白。通过STRING和Metascape软件对这些蛋白进行相互作用网络分析和通路富集热图分析,可知...  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

早产儿血清25-羟维生素D和维生素D结合蛋白水平与支气管肺发育不良的关系

背景及目的支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)是早产儿,尤其是极低、超低出生体重儿远期最常见的严重并发症之一,可导致住院时间延长、慢性呼吸系统疾病高发、新生儿再次住院率增加、生长发育迟缓等,是新生儿后期死亡的主要原因之一,严重影响早产儿的存活率和生存质量,给家庭和社会带来严重负担。目前,BPD的发病机制仍不明确,有研究显示维生素D(vitamin D)和维生素D结合蛋白(vitamin D binding protein,DBP)通过调节胎儿的肺发育及成熟、减轻高氧及炎症反应导致的肺损伤等环节参与肺部疾病的发生和发展过程。本研究通过分析早产儿血清25-羟维生素D(25-hydroxy vitamin D,25-(OH)D)和维生素D结合蛋白水平的变化,探讨25-(OH)D和DBP水平与BPD发生的关系,为BPD的临床防治提供新思路。方法选取2017年3月至2018年9月出生于郑州大学第...  (本文共52页) 本文目录 | 阅读全文>>