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烟草中与RNA干扰抑制子HC-pro互作蛋白的鉴定

马铃薯Y病毒的HC-pro蛋白是一个抑制能力很强的RNA干扰抑制子。为研究HC-pro蛋白抑制RNA干扰的分子机制,我们试图利用马铃薯Y病毒的HC-pro为诱饵蛋白,通过酵母双杂交从烟草cDNA文库中筛选出与RNA干扰有关的蛋白因子。利用Clontech公司的酵母双杂交试剂盒,在宿主菌AH109中,通过酵母菌的自我重组把烟草叶片的cDNA文库构建在cDNA文库载体pGADT7-Rec上;把HC-pro的cDNA连接到载体pGBKT7上构建成诱饵载体,然后转化到酵母菌Y187中。把含有cDNA文库的酵母菌AH109与含有诱饵载体的酵母菌Y187进行交配,把交配后的菌液直接涂布到SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp四缺培养基上进行筛选。通过两轮四缺培养基筛选和α-X-半乳糖苷酶活性检测,共有136个克隆显示α-X-半乳糖苷酶活性。在这136个克隆中,共测出120个cDNA的序列,编码21个蛋白因子。将这21个cDNA质粒与诱  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

《大豆科学》2013年06期
大豆科学

大豆花叶病毒HC-Pro基因保守序列克隆及其RNAi载体的构建

大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)病是全球最主要的大豆病害之一,严重危害大豆的产量和品质。RNA干扰(RNA interference,RNAi)能够在mRNA水平特异性沉默同源靶基因,为抗病毒作物的培育提供了新的途径。本研究对国内外11个不同SMV流行株系的HC-Pro基因进行了核苷酸序列比对,并以...  (本文共6页) 阅读全文>>

《植物病理学报》2001年02期
植物病理学报

玉米矮花叶病毒HC-Pro的纯化及抗血清制备

本实验提纯了玉米矮花叶病毒 ( MDMV)的辅助成份—蛋白酶 ( HC- Pro) ,并制备了其抗血清。MDMV HC- Pro的分子量约为 57k D,提纯产量为 0 .3mg/ 10 0 ...  (本文共4页) 阅读全文>>

《生物工程学报》2001年03期
生物工程学报

马铃薯Y病毒HC-Pro中心区域在病毒协生作用中的主导地位

利用PCR方法获得了马铃薯病毒中国株系 (PVY C)HC Pro基因的 5个缺失突变体 ,构建了相应的植物表达载体。通过土壤农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导法转化了烟草品种K32 6 (Nicotinatabacumc...  (本文共5页) 阅读全文>>

《植物病理学报》2000年03期
植物病理学报

玉米矮花叶病毒HC-Pro在蚜虫传毒过程中的作用机制

本文用亲合印迹法测定了玉米矮花叶病毒 ( MDMV)与 MDMV HC- Pro,及二者与蚜虫蛋白之间的互作。结果表明 ,MDMV HC- Pro可以与 MDMV结合 ,也可以直接与 MDMV的介体——麦二叉蚜 ( Schizaphis graminum)中分子量约为 56k D的可溶性蛋白结合...  (本文共5页) 阅读全文>>

《玉米科学》2010年03期
玉米科学

侵染玉米的甘蔗花叶病毒HC-Pro基因的克隆与表达

采用RT-PCR方法从郑州地区感染甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)的玉米叶片中克隆病毒编码的辅助成分-蛋白酶基因(Helper component proteinase,HC-Pro),基因大小1380bp,编码460个氨基酸。序列比对和系统进化树...  (本文共5页) 阅读全文>>