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应用噬菌体展示技术对对虾白斑综合症病毒(WSSV)中和抗体及感染相关蛋白的研究

对虾白斑综合症自1992年爆发以来,以其传播速度快,致死率高的特点,对全世界各国的对虾养殖业造成了严重的威胁。引起该病的病原体——对虾白斑综合症病毒(WSSV),在分类学上已经被鉴定为一个新的病毒家族中的新种,其结构非常复杂,对其感染宿主的分子机理的研究难以借鉴已知病毒的研究结果。而且对虾细胞系尚未成功建立,这对WSSV中和抗体的筛选及感染相关蛋白的研究带来了困难。为此,本研究应用噬菌体展示技术对WSSV的中和抗体及感染相关蛋白进行了研究。本研究以对虾淋巴原代细胞培养为基础,建立了一种高通量体外筛选中和抗体的方法。应用该方法对本实验室已获得的抗WSSV的单链抗体进行筛选,得到了一个能够阻止WSSV与对虾淋巴原代培养细胞结合的单链抗体P1D3。活体中和实验也证实该单链抗体具有一定的中和作用。由于单链抗体是在大肠杆菌中表达和制备的,能够低成本,快速地进行无限扩增,因此该单链抗体有望发展成一种具有抗病毒能力的对虾饲料添加剂。为了完善上  (本文共150页) 本文目录 | 阅读全文>>

《Animal Husbandry and Feed Science》2017年06期
Animal Husbandry and Feed Science

Immune Priming Induced by Heat-inactivated White Spot Syndrome Virus (WSSV) in Fenneropenaeus chinensis Cultured at Different Temperature

[Objective]This study was designed to explore whether heat-inactivated white spot syndrome virus(WSSV)could induce immune priming in Fenneropenaeus chinensis.[Method]Shrimps cultured at 15(group E_(15℃)),23(group E_(23℃)),28(group E_(28℃))and 32(group E_(32℃))℃were fed for six successive days with the meat of WSSV-infected shrimps,which had been treated at 60℃for 1 h.Meanwhile,the shrimps of positive control were fed...  (本文共7页) 阅读全文>>

上海海洋大学
上海海洋大学

微卫星标记在凡纳滨对虾遗传背景及抗WSSV性能分析中的应用

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)以其适应能力强、生长速度快、抗逆性强等优势,现已成为目前世界上养殖产量最高的对虾品种。我国凡纳滨对虾苗种主要来源于进口亲虾(SIS、PRIMO、正大等)、国内自主选育新品种及二、三代自繁苗种,遗传背景比较复杂。同时,凡纳滨对虾养殖受多种病原(如IHHNV、TSV、VP_(AHPND)、YHV、IMNV、WSSV等)影响,其中WSSV依然是危害最大的病原之一,其发病快,死亡率高,极大制约着凡纳滨对虾养殖业的发展。结合目前国内凡纳滨对虾的养殖现状,本文以凡纳滨对虾引进群体及国内不同商业品牌苗种为研究材料,利用微卫星分子标记进行家系亲权鉴定、遗传多样性分析及抗WSSV性能差异分析,以期为凡纳滨对虾优良品种选育工作提供基础参考数据。本研究取得的主要结果如下:1.基于SSR标记的凡纳滨对虾家系亲权鉴定以凡纳滨引进群体构建的36个家系子代与母本(共计396尾)为实验材料,建立直接扩增PC...  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

上海海洋大学
上海海洋大学

WSSV变异分析及wsv089和wsv150酵母双杂交诱饵载体的构建

白斑综合征病毒(WSSV)是造成全球范围内虾类养殖中经济损失的一个主要原因。为了解我国WSSV的流行变异情况,本研究对5个高变异区ORF14/15、ORF23/24、ORF75、ORF94、ORF125以及wsv089、wsv150进行了变异分析,并构建了wsv089和wsv150的酵母双杂交诱饵载体。具体内容如下:选取2017年中国部分地区的42个WSSV阳性样本,对ORF14/15、ORF23/24、ORF75、ORF94和ORF125共5个可变区进行PCR特异性扩增,分析其序列的缺失情况和重复单元(Ru)中单核苷酸多态性的变化。研究结果显示,在ORF14/15的扩增中各分离株共出现4种缺失片段,各片段之间差异较小;ORF23/24只出现11945bp的缺失片段;ORF75扩增中,总RUs数目为3、4、9,其中45bp的RUs在12、27、80位点发生多核苷酸多态性;ORF94的RUs数目为6,且均在48bp的位置出现单核苷...  (本文共73页) 本文目录 | 阅读全文>>

厦门大学
厦门大学

凡纳滨对虾GSK3β在WSSV感染过程中功能的初步研究

作为我国水产养殖的重要支柱产业,凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖给我国带来了巨大的经济价值及社会效益,然而病害问题却一直制约着该养殖产业的健康可持续发展。其中,白斑综合症病毒(WhiteSpotSyndromeVirus,WSSV)是迄今造成对虾病害最为严重的一种病原体,能够引起养殖对虾的大规模死亡。但是截止目前,仍未找到一种切实可行的方法来控制该病毒感染的发生及扩散。因此,探索宿主与病毒之间的相互作用机制,对寻找预防及治疗WSSV的潜在靶点具有重要意义。GSK3β作为一种在进化历程中极为保守的丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶,是胞内众多信号转导途径的交汇点及关键调节因子,参与调控着细胞分化、增殖、凋亡及免疫反应等诸多生理过程。本文中,我们从凡纳滨对虾中克隆得到了 GSK3β的同源基因(命名为LvGSK3β),并对其分子特征以及在WSSV感染过程中的作用机理进行了一个初步探索。结果表明,WSSV的感染不仅可以明...  (本文共82页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

对虾病毒性疾病的流行病学调查及与NM23相互作用的WSSV结构蛋白的筛选

随着经济的不断发展和人们意识的提高,高蛋白的水产品受到了人们的广泛喜爱,水产养殖业有了很大的发展。其中,对虾养殖也逐渐转变为集约化养殖模式。由于对虾养殖密度大,防治措施不完善,使得对虾的病毒性疾病层出不穷。至今,病毒性疾病仍是威胁虾类养殖的主要因素,其中危害较大的病毒有对虾白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)、传染性皮下及造血组织坏死病毒(Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)桃拉综合征病毒(Taura syndrome virus,TSV)、黄头病毒(Yellow Head Virus,YHV),这几种对虾病毒性疾病均传播速度快、发病率高,使得对虾养殖遭受严重的经济损失。目前,仍然没有针对对虾病毒性疾病的特效药,因此检测和防疫是对虾健康养殖的主要手段。本实验以2015年5月~2016年12月采集的143...  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>