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信号转导通路在癫痫发病中作用机制的实验研究

第一部分无镁诱导体外培养大鼠海马神经元癫痫模型的建立目的 研究体外原代培养新生大鼠海马神经元的方法,观察神经元的纯度、生长特性和生存状态,并观察在无镁培养液(Mg~(2+)-free media)短暂作用后神经元产生癫痫样放电的情况,以建立一种海马神经元的癫痫模型,为进一步探讨癫痫的发病机制提供基础。方法 取新生24h的wistar大鼠分离海马神经元培养,采用神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)鉴定神经元,倒置相差显微镜下观察神经元的生长情况。培养至第10天采用全细胞膜片钳技术记录神经元在无镁培养液处理不同时间后的放电情况,并应用透射电镜和流式细胞术检测神经元的生存状态。结果 神经元种植12~24h后大部分贴壁,随时间延长形态多变,突起逐渐增多,神经元突起间互相接触形成网络。培养第7~10d时细胞最为丰满,到28d培养液中有悬浮的细胞碎片。NSE鉴定阳性反应细胞的纯度第3天为95.2±4  (本文共123页) 本文目录 | 阅读全文>>

黑龙江中医药大学
黑龙江中医药大学

地黄饮子对Aβ致海马神经元损伤影响的实验研究

本课题通过建立β淀粉蛋白损伤离体培养的海马神经元模型,运用光、电镜技术及免疫组化、生物化学、高效液相及分子生物学等先进的检测手段和方法,从细胞及分子水平进一步探索了Aβ与老年性痴呆(AD)发生、发展密切相关的综合机制,从而全面深入地探讨了地黄饮子防治AD的作用机理。结果显示:一、地黄饮子能有效改善海马神经元生存状态,提高细胞生存活力。二、地黄饮子能明显降低海马神经元受β淀粉蛋白刺激时即早基因c-fos和c-jun的过度反应,提高海马神经元对外界不良刺激的应激性。三、地黄饮子能提高培养液中SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化酶活性,提高对自由基清除能力。四、地黄饮子能有效抑制β淀粉蛋白损伤海马神经元所致的钙超载现象,保护细胞膜结构。五、地黄饮子是通过调控bcl-2/bax的比值、降低caspase-3基因mRNA的表达来抑制β淀粉蛋白损伤时海马神经元的过度凋亡。六、离体实验结果表明,地黄饮子对海马神经元的保护作用呈剂量依赖性,高剂...  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>

《实验动物与比较医学》2019年06期
实验动物与比较医学

裸鼹鼠海马神经元纯化模型建立及其低氧耐受特性机制的初步研究

目的建立一种裸鼹鼠海马神经元的纯化培养方法,并初步探讨其低氧耐受特性。方法收集妊娠60~65 d裸鼹鼠胚胎海马组织内的细胞,利用含有Neurobasal+2%B27+10μmol/L5-氟尿嘧啶的培养基进行神经元纯化,海马神经元维持培养基为含有体积分数2%B27的Neurobasal培养基。体外贴壁培养6~7 d,采用倒置显微镜观察细胞的生长状态,利用神经元特异核蛋白(NeuN)抗体进行...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中国医学装备》2014年S2期
中国医学装备

补阳还五汤对阿尔茨海默病模型小鼠海马神经元细胞凋亡的影响

探讨补阳还五汤对阿尔茨海默病模型小鼠海马神经元细胞凋亡的影响。方法雄性小鼠随机分成对照组、模型组、治疗组(吡拉西坦0.62 g·kg~(-1)·d~(-1))、补阳还五汤高剂量组(37.06 g·kg~(-1)·d~(-1))、补阳还五汤...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中华中医药杂志》2014年03期
中华中医药杂志

四逆散含药血清体外对海马神经元发生的影响

目的:研究四逆散对海马神经元发生的影响。方法:采用皮质酮(CORT)抑制海马神经元发生的体外模型,在原代海马神经元培养体系中加入CORT后,运用MTT法测定神经元存活率,以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记增殖细胞,以神经元特异性烯...  (本文共4页) 阅读全文>>

《黑龙江医药科学》2013年03期
黑龙江医药科学

无镁诱导癫痫海马神经元模型线粒体膜电位和凋亡的变化

目的:观察无镁诱导癫痫海马神经元模型线粒体膜电位和凋亡的变化。方法:利用无镁诱导海马神经元制备癫痫样模型,应用流式细胞仪分别观察正常对照组、模型组...  (本文共2页) 阅读全文>>