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乙型肝炎病毒核心启动子及其上游顺序对其基因表达的调控

构建了线性化的、从基本核心启动子(Cp)开始并有不同长度Cp上游顺序的、含完整转录单元的HBV基因组克隆,以研究Cp及其上游顺序对HBV基因表达的调控及对HBV子代DNA复制的影响。发现从  (本文共9页) 阅读全文>>

《世界华人消化杂志》2003年08期
世界华人消化杂志

羧肽酶N调节乙型肝炎病毒核心启动子表达活性的研究

目的:乙型肝炎病毒(HBV)的感染,不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝纤维化、肝细胞癌的发生发展密切相关。为深入研究HBV调节表达的机制,我们应用噬菌体展示技术,以HBV核心启动子DNA片段为固相支持物,筛选肝细胞cDNA文库,获得HBV核心启动子的肝细胞结合蛋白-羧肽酶N(CPN)。CPN是一种从多肽和蛋白质C端氨基酸残基分离的血浆金属蛋白酶,他在调节激肽和过敏毒素的生物活性上起关键作用。CPN是分子量280kD的四聚体,包含两个50KD酶性亚单位和两个83kD调节亚单位。核心启动子产生两个3.5kb RNA:前-核心和前基因组RNA。前-核心RNA编码前-核心蛋白和e抗原,前基因组RNA不仅作为mRNA编码核心蛋白和聚合酶蛋白,而且与病毒蛋白一起包埋入核衣壳,作为模板逆转录。前基因组RNA的表达调控在病毒复制周期中起着关键作用。核心启动子分为两部分:基本核心启动子和核心上游调节元件(CURS),其上游为负性调节元件(NER...  (本文共4页) 阅读全文>>

天津农学院
天津农学院

牛CMYA1基因肌肉特异性核心启动子筛选研究

获得一个来源于自身且高效的肌肉特异性表达启动子对于高产优质转基因肉牛的研究和培育具有重要意义。在前期研究中,本实验室已经验证了牛CMYA1为肌肉组织特异性表达基因。本研究在前期工作的基础上,深入开展牛CMYA1基因核心启动子的筛选,主要工作有克隆牛CMYA1基因启动子,验证其启动子活性和肌肉特异性表达特性。同时,通过CMYA1启动子缺失研究,筛选CMYA1基因的核心启动子序列,最终获得天然的牛CMYA1基因肌肉特异性启动子,为转基因动物的研究提供理想的实验材料,并为进一步揭示CMYA1基因的转录调控机理提供理论支持。本研究利用RT-PCR的方法对牛CMYA1基因的肌肉组织特异性表达进行验证,随后,通过添加外源酶切位点的方法克隆牛CMYA1基因启动子全序列(1155bp),然后构建pEGFP-1-CMYA1启动子载体,分别转染小鼠C2C12细胞以及牛成纤维细胞,在细胞水平验证CMYA1基因启动子活性及其肌肉特异性表达特性。为进一步...  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

鹅AMH基因克隆、核心启动子鉴定及GATA-4和WT1对其转录的影响

抗缪勒管激素(Anti-mullerian hormone,AMH)属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族,现已证实TGF-β/Smad信号转导通路是调控卵泡发育的重要途径。在卵巢组织中,AMH由卵泡颗粒细胞合成和分泌,并且作为体内唯一抑制原始卵泡生长的细胞因子,能通过抑制卵泡募集和FSH敏感性影响卵泡发育。然而,还缺少关于鹅AMH基因功能及其转录调控的系统研究。因此,本研究克隆鹅AMH基因序列,分析鹅AMH基因编码区和启动子区域序列特点,构建AMH基因启动子系列缺失载体,通过瞬时转染和双荧光素酶报告基因活性分析鹅AMH基因核心启动子区,预测关键转录因子;探究不同阶段鹅卵泡颗粒细胞中AMH基因及其关键转录因子的表达特点和基因表达量间的相关性;共转染关键转录因子(GATA-4)真核表达载体及其结合位点定点突变的AMH基因启动子载体,通过双荧光素酶报告基因活性检测确认GATA-4能通过结合鹅AMH基因启动子进而调控其转录。主要研究...  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川农业大学
四川农业大学

鹅CYP17/19基因克隆、组织表达及CYP19核心启动子区分析

P450超家族成员CYP17和CYP19分别是调控动物雄激素和雌激素合成的关键限速酶,在调控卵泡类固醇激素含量,维持卵泡生长发育过程中有重要作用。CYP17和CYP19在哺乳动物卵泡发育中的功能已被广泛研究,但禽类卵泡发育与哺乳动物存在较大差异,CYP17和CYP19在禽类卵泡发育过程中的表达调控机制及功能有待进一步研究。为此,本实验以处于产蛋高峰期的天府肉鹅母系母鹅卵泡为研究对象,克隆鹅CYP17和CYP19基因序列并检测其在卵泡膜层和颗粒层中表达模式,并初步探究CYP19核心启动子的活性调控区域。主要研究结果如下:(1)首次获得鹅CYP17和CYP19全长cDNA序列,全长分别为1521bp和1512bp。鹅CYP17和CYP19基因与鸟类的同源性都大于90%,构建进化树发现二者都先与原鸡聚在一起,表明鹅CYP17和CYP19基因与鸟类的同源性和进化关系远高于其他物种,符合生物间的亲缘关系。(2)在等级前和等级卵泡中,CYP...  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

DHX15在HBV复制中的意义及其机制初步研究

目的:筛选DEx D/H-box家族中可能影响HBV增强子或核心启动子转录活性的基因,初步研究DHX15对HBV复制的调控作用。方法:1.克隆DEx D/H-box家族基因到表达质粒PCH9,并构建由HBV增强子和核心启动子驱动的海肾荧光素酶报告质粒pcore-Rluc;2.分别将各种DDX表达质粒与pcore-Rluc共转染Hep G2细胞,筛选影响Rluc荧光素酶活性的DDX家族成员。3.在HepG2细胞中共转染HBV1.3倍体质粒和DHX15表达质粒,通过Western blot检测DHX15在细胞中的表达,用Southern blot、Northern blot检测过表达DHX15对中HBV复制水平和转录水平的影响;4.构建HBV增强子与核心启动子截短突变体,确定DHX15在HBV增强子或核心启动子上的作用区域。结果:1.成功构建30种DEx D/H-box家族基因克隆;2.筛选出对HBV增强子/核心启动子有明显影响的基...  (本文共46页) 本文目录 | 阅读全文>>