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RNA干扰技术用于survivin基因表达的研究

目的:构建pSUPER-SVV表达载体,并在真核细胞中进行表达,验证survivin基因表达是否受到抑制。方法:设计特异性以survivin基因为靶序列的寡核苷酸序列,退火后将其连接于pSUPER.basic载体中,经测序鉴定插入序列的正确性。以脂质体转染方法将pSUPER-SVV干扰质粒转染人类宫颈癌(HeLa)细胞,应用流式细  (本文共3页) 阅读全文>>

昆明医学院
昆明医学院

RNA干扰抑制survivin基因表达诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的实验研究

研究背景及目的瘢痕疙瘩是皮肤损伤如创伤、烧伤或手术后引发的纤维化病理改变,以成纤维细胞(fibroblast)的过度增生和胶原等细胞外基质(extracellular matrix, ECM)的过度沉积为特征的纤维代谢性疾病。瘢痕疙瘩的形成会破坏人的体表完美,导致功能障碍,给患者带来极大的生理和心理上的痛苦,对瘢痕疙瘩的防治一直是临床研究的重要课题。具有独特生长特性以及临床表现的瘢痕疙瘩,被众多学者视为一种创伤愈合后形成的良性肿瘤,成纤维细胞是瘢痕形成过程中的关键效应细胞。近年来研究认为成纤维细胞的异常增殖是瘢痕疙瘩发病的重要机制,其增殖与凋亡的失衡是导致瘢痕疙瘩不断增生而且难已退化的细胞学基础。而survivin基因作为迄今为止发现的最强的凋亡抑制因子之一,和瘢痕疙瘩的形成有密切关系。研究表明:survivin基因可抑制成纤维细胞的程序化死亡,导致细胞的异常增殖和恶性转化,与瘢痕疙瘩形成密切相关。因此,抗survivin基因的...  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

Survivin特异的RNA干扰增强肺腺癌细胞对可溶性FasL敏感性

RNA干扰是一种典型的序列特异的转录后基因表达调控方式,在生物进化过程中高度保守。宿主通过RNA干扰抑制病毒等外源核苷酸的表达,从而维护自身基因组的稳定性。RNA干扰技术是基于RNA干扰现象发展起来的一项新技术,通过人工导入一段与目的基因同源的双链RNA序列使其mRNA降解,表达缺失,实现基因敲除。RNA干扰具有高度的特异性以及很高的效率,和以往采用的反义技术相比,抑制基因表达的功能要强大得多。RNA干扰技术在基因和蛋白功能研究、传染病、肿瘤和遗传病的基因治疗领域显现出良好的应用前景。目前实验室进行RNA干扰常用的小干扰RNA(siRNA small interfering RNA)片段来源主要有两种,一是细胞外合成,二是细胞内合成,包括以质粒为载体的细胞内合成和以病毒为载体的细胞内合成。经改造的质粒和病毒为载体的小干扰RNA片段可较长时间在真核细胞内表达,为肿瘤的基因治疗开辟了新的途径。由于环境污染和吸烟等不良生活习惯,肺癌已...  (本文共94页) 本文目录 | 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

Survivin基因沉默诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

第一部分人脑胶质瘤中重要凋亡相关蛋白表达的研究目的研究人脑胶质瘤组织中重要凋亡相关蛋白Survivin、p53、Caspase-3、Caspase-7 的表达,探讨其与细胞凋亡、增殖的关系。方法采用免疫组化SP 法检测了Survivin、p53、Caspase-3、Caspase-7 在48 例人脑胶质瘤和8 例正常脑组织中的表达情况。TUNEL 技术用于检测组织中细胞凋亡现象,Ki-67 增殖指数的检测则采用SABC 法。结果胶质瘤组织中的Survivin、p53、Caspase-3、Caspase-7 阳性率均高于正常脑组织组(P0.01), 分别达56.2%、52.0%、70.8%、68.8%。Survivin、p53 的表达水平随着肿瘤恶性程度的升高有增高趋势(P0.01)。Caspase-3、Caspase-7的表达与肿瘤的级别之间无等级相关性,但Caspase-3、Caspase-7 之间存在协同表达现象。Survi...  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

RNA干扰沉寂survivin表达及其对肝癌细胞凋亡和相关信号传导通路的影响

细胞凋亡抑制因子(inhibitor of apoptosis,IAP)家族是一类分布广泛、结构相关的抗凋亡蛋白,存在于病毒、酵母和哺乳动物细胞中,具有高度保守性。近期发现的survivin蛋白属于IAP家族成员,同样具有抑制细胞凋亡的特性,但它区别于其它IAP的特征是仅在肿瘤细胞中表达,而在正常成人组织中不表达;而且其表达与肿瘤的恶性程度及病人的预后密切相关。乙肝病毒X蛋白结合蛋白(HBXIP)是乙肝病毒X蛋白的结合蛋白,研究表明它与survivin关系密切,是survivin的协同作用分子,在survivin抑制细胞凋亡的过程中具有重要作用。RNA干扰(RNAi)技术是最近广泛用于抑制基因表达的新技术,主要用于基因功能和基因治疗学等方面的研究。本研究应用RNAi技术,研究在肝癌细胞株HepG2中转染针对survivin和HBXIP的siRNA后,survivin与HBXIP mRNA转录水平和survivin蛋白表达的变化;...  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

第一军医大学
第一军医大学

小分子RNA靶向抑制survivin基因在人胶质瘤细胞U251中表达研究

【背景】脑肿瘤是神经系统中常见的疾病之一,对人类神经系统的功能有很大的危害。在成人,恶性颅内肿瘤占全身恶性肿瘤的1.5%,居第十一位;在儿童,则占全身恶性肿瘤的7%。胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤之一,位于三大颅内肿瘤之首,其发病率占全部脑肿瘤40%以上。目前对于胶质瘤的治疗,尽管有手术、放化疗等多种的传统治疗手段,但恶性胶质瘤仍是高度致死性的肿瘤性疾病。据统计,罹患恶性胶质瘤(低度分化星形细胞瘤和胶质母细胞瘤)患者的2年存活率是5%,偏良性胶质瘤患者10年存活率是20%。随着对胶质瘤发病机制的深入研究以及分子生物学技术的日新月异,分子靶向治疗有望成为一种新的具有广阔前景的肿瘤治疗手段。肿瘤的基因靶向治疗是目前肿瘤生物治疗研究的热点领域之一。肿瘤基因靶向治疗的策略包括肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen,TAA)诱导的特异性细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)的过继免...  (本文共164页) 本文目录 | 阅读全文>>