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一个承载分子的设计与肽抗生素hPAB-β的高效表达

目的 通过设计一个承载蛋白分子高效表达肽抗生素hPAB β ,为大量制备hPAB β奠定基础。 方法 根据肽抗生素的特性 ,确立 4条设计原则 ,并据此设计一 489bp的承载蛋白编码序列 ,用化学合成法获得该序列并将之克隆到pQE 3 2中构建成表达载体 ,进一步将肽抗生素hPAB β基因插入上述表达载体 ,肽抗  (本文共4页) 阅读全文>>

第三军医大学
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人肽抗生素hPAB-β的基因克隆、表达及活性研究

传统的抗生素是由霉菌或放线菌产生的,霉菌或放线菌是人类寻找抗生素的传统领域。肽抗生素(peptide antibiotics)或称为抗微生物肽(antimicrobial peptide)则是近年来发现的由动物、植物、昆虫等生物体基因编码的具有抗生素样活性的肽类物质。它是机体免疫系统的重要组成部分,因其在作为抗感染制剂、食品防腐剂等方面具有广阔的应用前景而成为近年来国内外研究的热点之一。迄今已从动物、植物、昆虫等生物体内分离到肽抗生素300多种,新的肽抗生素还在不断被发现,有的类别还发现存在多种突变体。不同种类、不同突变体的肽抗生素活性有不同程度差异。为了获得结构简单、活性更强的肽抗生素,研究者们常常在克隆到肽抗生素分子后,通过构建其突变体库,从中筛选更理想的目的分子。这种筛选工作量大、盲目性强、成本高,目前在高活性肽抗生素分子的设计方面可借鉴的数据也不多。基于以上认识,我们进行了:①人源肽抗生素hPAB-β的基因克隆,成熟肽的...  (本文共190页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
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肽抗生素hPAB-β制备工艺优化及生物学活性初探

肽抗生素(peptide antibiotics)是近年来发现的生物体基因编码的具有抗微生物活性的小肽,通常是由12~60个氨基酸所组成,分子量﹤10kDa,是生物体天然免疫的重要组成部分。它作为一种新型的抗感染制剂,具有广谱、高效的杀菌活性,在传统抗生素耐药性问题日益严重的今天,已成为抗生素研发中的一个重要热点之一。在过去五年,围绕肽抗生素hPAB-β的研发工作中,我们已经基本形成了一条完整的生产工艺路线。肽抗生素hPAB-β是用简并引物从人皮肤角质形成细胞中克隆到的一人β型肽抗生素。在获得其碱基和氨基酸编码序列后,通过化学合成并复性,证实了其抗菌活性。然后根据其特性,我们设计并筛选到了一个承载分子PaP3.30(16.7kDa),利用该分子能使hPAB-β融合蛋白在大肠埃希菌中的表达量达到菌体总蛋白的40%。然而,由于目标蛋白hPAB-β(4.3kDa)在整个融合蛋白分子(23.6kDa)中只占约1/6,其实际表达量占菌体总...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国抗生素杂志》2004年03期
中国抗生素杂志

重组人肽抗生素hPAB-β及其突变体的活性测定与筛选

目的 测定重组人肽抗生素 h PAB- β及其突变体的抗菌活性 ,筛选理想的活性分子。方法 应用平板法和 MIC测定法检测重组表达的 h PAB- β及突变体 h PAB- β38、h PAB- β34对 8株实验室保存菌株及 10株临床分离菌株的杀菌能力 ,并以化学合成的肽抗生素 h PAB- β作对照 ;根据各目的分子抗菌能力的强弱 ,筛选理想的目标分子 ,并分析突变体结构的变化对其功能的影响。结果 重组 h PAB- β及突变体 h PAB- β38与化学合...  (本文共6页) 阅读全文>>

《医学研究生学报》2003年12期
医学研究生学报

肽抗生素hPAB-β基因串联体的构建及原核细胞表达初探

目的 : 构建肽抗生素hPAB β基因多拷贝串联体重组质粒 ,实现目的基因串联产物在大肠杆菌中的高效表达。 方法 :以表达质粒pQE 32为载体 ,利用同裂酶PstⅠ与AvaⅢ能产生相同粘端的特性 ,通过PCR扩增、酶切、连接、转化等操作 ,构建含不同数目hPAB β基因的串联体。对获得的重组菌用异丙基巯基半乳糖 (IPTG)诱导表达 ,T...  (本文共5页) 阅读全文>>

《第三军医大学学报》2002年04期
第三军医大学学报

肽抗生素hPAB-β的化学合成及其杀菌活性的初步证实

目的 化学合成、纯化并初步测定肽抗生素hPAB β的活性 ,为后续研究奠定基础。 方法 采用固相合成法合成肽抗生素hPAB β ,经RP HPLC纯化 ,用质谱进行分子量鉴定 ,谷胱甘肽氧化 还原法复性合成产物 ,进一步用阳离子...  (本文共3页) 阅读全文>>

《医学研究生学报》2003年09期
医学研究生学报

人肽抗生素hPAB-β分子的同源模建及其突变体设计

目的 :获得肽抗生素hPAB β的分子结构 ,设计其突变体。  方法 :在序列比较的基础上 ,利用同源分子对hPAB β进行同源模建 ,并以此为基础设计其突变体 ,通过PCR引入突变法获得突变体基因序列 ,将其克隆到原核融合蛋白表达质粒 pQE CP4中 ,转化JM 10 9大肠杆菌进行表达。  结果 :模...  (本文共5页) 阅读全文>>