分享到:

尿道致病性大肠杆菌fimA基因的克隆与表达

目的对尿道致病性大肠杆菌(UPEC)132编码Ⅰ型菌毛的结构基因fimA进行克隆与表达,建立免疫学检测方法。方法采用PCR方法扩增fimA基因,定向克隆pET32a载体,原核表达获得FimA重组蛋白;免疫小鼠制备FimA多克隆抗体;建立全菌ELISA方法,检测UPEC132的Ⅰ型菌毛表  (本文共3页) 阅读全文>>

天津医科大学
天津医科大学

尿道致病性大肠杆菌fimA基因的克隆与表达

[目的]泌尿道感染是临床常见病,造成泌尿道感染的大肠杆菌被称为尿道致病性大肠杆菌(UPEC)。Ⅰ型菌毛是UPEC主要毒力因子之一。本文对UPEC132编码Ⅰ型菌毛结构基因的fimA进行克隆与表达,并制备抗血清,为今后的研究工作提供帮助。[方法]1.采用甘露糖敏感血凝(MSHA)和fimA PCR进行Ⅰ型菌毛的表型和基因型检测。2.PCR扩增UPEC132 fimA全基因,采用T-A克隆fimA,进行测序。然后对其和pET32a分别用BamHⅠ和HindⅢ进行酶切,T4连接酶连接构建重组质粒pET32a-fimA。采用PCR和双酶切鉴定。3.将pET32a-fimA转入表达宿主E. coli BL21 (DE3),构建重组菌E. coli BL21 (DE3)/pET32a-fimA。重组菌经0.5mM IPTG 30℃诱导表达4h,超声裂解,离心分离上清与沉淀,分别进行SDS-PAGE分析。4.采用镍亲和层析法分离纯化E. co...  (本文共59页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林农业大学
吉林农业大学

猪源肠外致病性大肠杆菌fimA基因的克隆与表达研究

近年来,国内外许多学者相继报道了一类危害较为严重,可特定定殖于宿主肠道外的其他组织,并严重致病的一类新的大肠杆菌菌群——肠外致病性大肠杆菌(Extraintestinalpathogenic Escherichia coli,ExPEC)。ExPEC能引起人和动物肠外组织感染,可致使不同宿主发生脑膜炎、败血症、泌尿道感染和呼吸道感染。该病每年给全球公共医疗业及畜牧业造成巨大的财政支出,已引起全世界的广泛关注。肠外致病大肠杆菌以具有能引起肠外感染的特异性毒力因子为特征。其中菌毛是位于其菌体表面,与细胞运动、生物膜形成、粘附、致病因子释放等相关的一种蛋白质结构,作为重要的药物靶目标为国内外学者所关注。因此,研究编码Ⅰ型菌毛主体蛋白亚基的fimA基因具有重要意义。本试验从吉林某猪场采集了患有肺炎的猪肺、脑、心等组织。通过鉴别培养基及16SrDNA PCR鉴定,确定从其肺脏分离的菌株为大肠杆菌。经小鼠毒力试验、回归动物试验证实分离菌株毒...  (本文共48页) 本文目录 | 阅读全文>>

《口腔生物医学》2015年02期
口腔生物医学

两种fimA型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的:探究两种fim A型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法:采用组织块贴壁法培养人脐动脉平滑肌细胞。在厌氧条件下培养Ⅰfim A、Ⅳfim A型牙龈卟啉单胞菌,并与人脐动脉平滑肌细胞共同培养;在共培养2、8、24和48 h时,采用CCK-8法...  (本文共5页) 阅读全文>>

上海交通大学
上海交通大学

fimA Ⅱ型牙龈卟啉单胞菌在根尖周感染中的分布研究

目的:本研究采用两种牙龈卟啉单胞菌fimA II型引物,检测fimA II型牙龈卟啉单胞菌在根尖周感染中的分布情况,以及fimA II型与临床症状的相关性。材料与方法:采集135例临床原发性尖周炎感染根管样本,通过牙龈卟啉单胞菌16S rDNA特异引物PCR筛选牙龈卟啉单胞菌阳性样本,再利用两种牙龈卟啉单胞菌fimA II型特异引物,分别检测牙龈卟啉单胞菌fimA II型在不同症状根尖周感染中的检出率,并采用卡方检验分析牙龈卟啉单胞菌fimA II型与根尖周感染临床症状的相关性。结果:牙龈卟啉单胞菌在根尖周炎感染根管中的检出率为34.8%,根据牙龈卟啉单胞菌fimA II型传统引物与新引物所获得的fimA II型牙龈卟啉单胞菌检出率无明显差异(传统引物:11.8%;新引物:12.6%)。牙龈卟啉单胞菌fimA II型的检出率与瘘管正相关(P0.05)。结论:fimA II型牙龈卟啉单胞菌在根尖周炎感染根管内的检出率较高(10%)...  (本文共32页) 本文目录 | 阅读全文>>

《重庆医学》2017年16期
重庆医学

牙龈卟啉单胞菌fimA基因型的研究进展

牙周炎为致病微生物感染导致的慢性牙周疾病,致病微生物能够损伤牙齿支持组织~([1])。牙周炎和多种全身系统性疾病存在着较为密切的关系,已成为肺部感染、心血管疾病以及糖尿病等多种疾病的发病危险因素~(...  (本文共3页) 阅读全文>>

《食管疾病》2019年04期
食管疾病

食管癌患者中牙龈卟啉单胞菌fimA基因的检出率和基因型分布

目的分析牙龈卟啉单胞菌fim A基因在食管癌患者和牙周健康人群口腔中的检出率和基因型分布。方法收集74例食管癌患者和135例牙周健康者口腔牙龈标本,PCR扩增fim A基因并测序,结果与标准菌株进行比对分型,并对实验数据进行统计分析。结果口腔内fim A基因PCR扩增结果为:食管癌组阳性52例(70.27%),牙周健康组阳性56例(41.48%)。食管癌组检出率明显高于牙周健康组(P0.01)。食管癌组fi...  (本文共5页) 阅读全文>>