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两种方法转染狂犬病毒糖蛋白基因的比较研究

两种方法转染狂犬病毒糖蛋白基因的比较研究李萍萍,吴柏春(武汉生物制品研究所)(华中师范大学昆虫学研究所  (本文共2页) 阅读全文>>

苏州大学
苏州大学

MicroRNA Let-7f参与胰腺癌侵袭与迁移的相关性研究

目的观察MicroRNA Let-7f对胰腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭与迁移等生物学行为的影响,初步探讨Let-7f在胰腺癌发生发展中的作用及其可能机制,为临床胰腺癌的早期诊断及抗癌药物的开发提供新的靶点和实验依据。方法1、采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)的方法检测Let-7 mi RNAs在正常胰腺细胞株HPDE6C7及胰腺癌细胞株PANC-1和Bx-PC3中的表达差异。2、分别运用功能获得性实验和功能缺失性实验将Let-7f模拟物和抑制物转染至胰腺癌PANC-1和Bx-PC3细胞中,RT-qPCR法检测转染后Let-7f在细胞中的表达变化情况。采用CCK-8法检测改变细胞内Let-7f表达对细胞增殖的作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测Let-7f表达变化对细胞凋亡的影...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所)
中国科学院大学(中国科学院上海药物研究所)

纳米尺寸效应和转导方式对基因转染的影响

基因治疗是将核酸药物输送至靶细胞,进而表达所需的基因产物(核酸或蛋白质),取代或者矫正患者的缺陷基因功能,达到治疗目的。因其具有高疗效、低毒副作用的优点,已成为肿瘤等基因类疾病的潜在治疗方法之一。基因输送方法主要包括病毒载体输送、非病毒载体输送和物理输送。与病毒载体相比,非病毒载体,具有低免疫原性、易实现规模化生产和制备、便于修饰等优势。但是非病毒载体的体内递送基因效率较低,限制了其临床转化。即使是被广泛研究的阳离子聚合物(即聚乙烯亚胺(PEI)),仍然存在很多未被阐明的递送机制。由于实验条件和操作的巨大差异,文献报道中经常出现相互矛盾的转染结果。所以,在纳米复合物制备过程中,需要对一些关键参数进行识别和严格控制。制备工艺参数(如浓度或者混合物体积)对纳米粒结构的影响及其对基因转染的影响,目前对这些方面的了解仍不多。本课题考察了不同浓度(或反应体积)对PEI/DNA复合物的纳米特性的影响,发现在高浓度(或小反应体积)条件下制备,...  (本文共126页) 本文目录 | 阅读全文>>

内蒙古医科大学
内蒙古医科大学

兔S100A6基因表达载体构建、鉴定、转染及其对神经细胞增殖影响的研究

目的:利用分子生物学方法获取兔的Soluble-100A6(S100A6)蛋白的基因并构建其质粒表达载体,采用脂质体介导转染技术分别将目的基因表达载体和空载体转染入雪旺细胞(Schwann Cells,SCs)中,鉴定兔S100A6基因表达载体,研究S100A6蛋白在SCs中的表达情况及其对SCs增殖的影响。方法:取家兔坐骨神经,提取SCs并培养;构建S100A6基因表达载体质粒,对质粒进行相关验证、鉴定,采用脂质体介导转染技术分别将S100A6蛋白c DNA质粒表达载体与空载质粒转染入SCs中,即:A组:S100A6c DNA+SCs;B组:空白载体+SCs。转染成功后采用蛋白印迹法(Western Blot检测S100A6蛋白在SCs中的表达,分析两组S100A6蛋白表达量的变化;同时,采用免疫细胞化学检测两组SCs增殖情况。结果:1、经凝胶电泳及PIRES2-EGFP-S100A6双切酶验证,初步鉴定S100A6质粒构建成...  (本文共41页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

慢病毒介导Fas-siRNA和Sox9转染兔退变髓核细胞的体内实验研究

目的:通过慢病毒介导Fas-si RNA和Sox9体内转染兔退变髓核细胞,观察单基因转染与双基因联合转染对退变椎间盘的生物学效应。研究方法:将健康成年新西兰大白兔随机分为5组:A.PBS组,B.空病毒组,C.Fas-si RNA组,D.Sox9组,E.双基因组;针刺椎间盘建立新西兰大白兔退变椎间盘模型,使用微量注射器分别向5组实验兔椎间盘内注入20μL的PBS磷酸盐缓冲液、慢病毒、r LV-h Fas-sh RNA、r LV-h Sox9、r LV-h Fas-sh RNA+r LV-h Sox9;转染后第8周、12周、24周分别对实验动物进行MRI扫描观察其椎间盘信号变化。然后处死实验动物,取出退变椎间盘,应用Western-Blot技术检测椎间盘内II型胶原、蛋白多糖水平,应用RT-PCR技术检测Fasm RNA和Sox9 m RNA表达水平。结果:转染后第8周、12周、24周对实验动物行MRI扫描,观察椎间盘MRI T2加...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

南华大学
南华大学

GKN2高表达阻断JAK2/STAT3通路抑制SGC7901细胞迁移和侵袭

目的探究胃动蛋白2(Gastrokine 2,GKN2)对人胃癌细胞SGC7901迁移和侵袭的影响,并探讨GKN2对人胃癌SGC7901细胞JAK2/STAT3通路的调控作用,为阐明抗胃癌机理提供基础理论依据。方法1、将构建好的GKN2真核载体质粒瞬时转染人胃癌SGC7901细胞,在荧光倒置显微镜下观察其转染效率,Western Blot验证GKN2转染是否成功。2、运用MTT实验、细胞划痕试验、Transwell迁移和Transwell侵袭实验分析GKN2转染对人胃癌细胞SGC7901迁移和侵袭的影响。3、采用Western blot方法观察GKN2转染后JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达变化。4、采用ELISA检测血清GKN2浓度,分析胃癌患者与正常血清GKN2浓度差异。结果1、转染实验结果显示,未转染组无荧光表达,空载体组及GKN2转染组转染效率分别约为91%及90%。Western Blot实验结...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>