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一种高温乳糖酶的酶学性质及对牛乳中乳糖的水解

对重组大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶酶学性质的研究表明,该酶最适反应温度为55℃,最适pH值为7.0,在50℃时具有良好的热稳定性。K+,Mg2+,M  (本文共4页) 阅读全文>>

《现代食品科技》2013年04期
现代食品科技

耐热β-半乳糖苷酶的结构分析及同源建模

预测耐热β-半乳糖苷酶的初级结构和高级结构,为进一步了解该蛋白的结构特征提供理论依据。应用ProtParam、ProtScale、TMHMM Server v.2.0、SignalP 4.0 Server、SOPMA、PSO...  (本文共5页) 阅读全文>>

《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2008年10期
西北农林科技大学学报(自然科学版)

耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究

【目的】研究耐热β-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达,并检测其酶学性质,为耐热β-半乳糖苷酶的应用和工业化生产奠定基础。【方法】利用基因工程的原理和方法,将来源于嗜热脂肪芽孢杆菌的耐热β-半乳糖苷酶基因(bgaB)克隆到大肠杆菌pET表达系统(pET-28a(+)),并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。将构建的重组菌(pET28a-bgaB)在含硫酸卡那霉素的液体LB培养基中以IPTG为诱导剂,对表达产物的最适反应温度、最适反应时间I、PTG...  (本文共8页) 阅读全文>>

云南师范大学
云南师范大学

粪便微生物宏基因组来源的β-半乳糖苷酶的异源表达及酶学性质研究

乳糖是哺乳动物乳汁及乳制品中存在的主要碳水化合物,当人们饮用牛奶后,在消化过程中乳糖必须被β-半乳糖苷酶催化水解为半乳糖和葡萄糖才能被机体吸收利用。据报道,世界上约有十分之一的人由于体内缺乏β-半乳糖苷酶而患有乳糖不耐受症;饮用牛奶后,身体会出现腹泻、呕吐等不良反应。其中,β-半乳糖苷酶具有很大的商业利用情景,性质优良的β-半乳糖苷酶在生产生活中具有重要的实用价值。β-半乳糖苷酶属于糖苷水解酶的一种,广泛存在于自然界中。根据氨基酸序列的相似性,将β-半乳糖苷酶归入五种糖苷水解酶(Glycoside hydrolases,GH)家族,包括1、2、35、42和59家族。其中,部分β-半乳糖苷酶除了具有水解活性以外,还具有转糖基活性。目前,对β-半乳糖苷酶的研究较多,但尚未有来源于动物胃肠道且具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶报道,以及很少有报道具有耐盐性的β-半乳糖苷酶;由于β-半乳糖苷酶被广泛应用于食品工业、医学和生化分析等邻域,耐盐...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江农林大学
浙江农林大学

耐热β-半乳糖苷酶在枯草杆菌芽孢表面的展示及酶学性质研究

β-半乳糖苷酶是一种在食品工业中有着广泛应用的酶制剂。近年来,有关β-半乳糖苷酶的应用开发主要受制于稳定性低、有机溶剂耐受性差、重复利用率低等因素,这些因素限制了β-半乳糖苷酶在食品工业的进一步应用。β-半乳糖苷酶枯草杆菌芽孢表面展示技术是一种将β-半乳糖苷酶固定化于芽孢表层蛋白的一种固定化技术,由于枯草杆菌芽孢具有高稳定性和抗逆性,使得芽孢可以成为一个优良的固定化载体。但是,展示在芽孢上的β-半乳糖苷酶酶活性较低一直制约着该生物催化剂的发展。本研究采取三种不同类型的展示机制将嗜热脂肪芽孢杆菌来源的耐热β-半乳糖苷酶展示在枯草杆菌芽孢表面,然后对这三者的展示效率以及酶学特性进行分析,优化芽孢展示机制,筛选出最适用于食品工业的生物酶制剂。首先,选用不同嗜温微生物来源的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型黏附模块(cohesin)与对接模块(dockerin),成功构建5种基于脚手架骨架(cohesin-dockerin)相互作用原理的β-Gal芽孢表...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

上海海洋大学
上海海洋大学

深海微生物低温β-半乳糖苷酶的表达、酶学性质及稳定化研究

深海是一个黑暗、低温、高压和营养贫瘠的生态环境。深海微生物为了适应这样极端的环境,微生物中分离得到的海洋微生物酶因此具有低温催化高效、耐盐、pH耐受范围广等特殊的酶学性质,因此具有很大的应用潜力。本研究从马里亚纳海沟深海微生物Alteromonas sp.ML117中克隆出产β-半乳糖苷酶的基因Bgal,通过构建表达载体转化至大肠杆菌中进行外源表达。并对其进行纯化和酶学性质的研究,通过单因素和响应面实验筛选并优化了Bgal液体酶液的酶活保护剂最佳配方。通过对Bgal的氨基酸保守序列分析,重组酶Bgal属于糖苷水解酶2家族。SDS-PAGE和凝胶过滤色谱实验结果证明Bgal蛋白为四聚体。通过对表达条件的单因素实验优化,得到了最佳的表达条件是:在37~oC、OD_(600)为0.4时,加入0.2 mM IPTG于20~oC下继续诱导表达20 h。采用Ni~(2+)亲和层析柱进行分离纯化得到电泳纯的Bgal,纯化倍数为2.1。Bgal...  (本文共68页) 本文目录 | 阅读全文>>