分享到:

米曲霉(Aspergillus oryzae)植酸酶的分离纯化及性质研究

从5株霉菌中筛选出1株产胞外植酸酶最高的菌株(Aspcrgillusoryxae;简称霉菌3号)。经发酵,硫酸铵分级沉淀,Sephadex G—100凝胶过滤、SE—Sephadex G—50  (本文共7页) 阅读全文>>

山东大学
山东大学

米曲霉植酸酶的分离纯化、性质研究及其基因的克隆

植酸及其盐类广泛存在于自然界的各种植物组织和粮食产品中,是磷和肌醇的主要存储形式,同时对保持机体磷的平衡起重要作用。植酸酶作为一种单胃动物的饲料添加剂,可以提高植物饲料中磷的利用率,减少磷排泄对环境的污染,同时还能降低植酸的抗营养作用。本文通过对米曲霉进行发酵,优化其产植酸酶的条件,提高植酸酶的产量,以期望可以直接用于生产。通过分离、纯化,得到电泳纯的米曲霉植酸酶组分。对该组分进行分析,确定该酶的分子量及热稳定性等理化性质。并通过化学修饰的方法,对该酶的活性中心进行分析,通过实验,确定了该酶的活性中心包括精氨酸、组氨酸等,从氨基酸的角度证明该酶属于phyA类植酸酶。为建立基因和蛋白质之间的联系,本文采用PCR方法从米曲霉染色体DNA中扩增得到植酸酶基因(phyA),克隆至载体pMD18-T上,构建了重组质粒pMD18-T-phyA。对pMD18-T-phyA上插入的植酸酶基因外源片段进行了测序和序列分析。测序结果表明:米曲霉植酸...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

沈阳农业大学
沈阳农业大学

表达蛋白酶的米曲霉工程菌构建及发酵特性研究

丝状真菌米曲霉是发酵工业的重要菌种,具有良好的蛋白分泌能力和较高的食品安全性。本研究应用分子生物学技术,重组构建了5株新型米曲霉工程菌,将其应用于豆粕原料的发酵,比较和研究了外源蛋白酶基因的导入对米曲霉发酵作用的影响,并对菌株所表达的外源蛋白酶进行了分离纯化及酶学特性的研究。研究结果对于以米曲霉为宿主的外源基因的转化和调控,以及米曲霉优良菌株的选育具有重要的意义。本研究首先应用PCR扩增的方法从地衣芽胞杆菌、短小芽孢杆菌和黑曲霉中扩增到了3个碱性蛋白酶基因和3个酸性蛋白酶基因。运用生物信息学的方法对蛋白酶基因进行序列分析和氨基酸序列预测。以双元表达载体pCAMBIA1304为载体骨架,通过连入米曲霉高效表达元件淀粉酶启动子和糖苷酶终止子构建米曲霉表达阅读框。在表达阅读框中分别连入单个外源蛋白酶基因,构建了4个表达载体paa-subC、paa-asp、paa-Ap、paa-pep。采用以自剪切肽(T2A肽)作为连接的策略,将两个碱...  (本文共142页) 本文目录 | 阅读全文>>

南昌大学
南昌大学

不同米曲霉菌株基本培养特性的比较及脂肪酶的外源表达

米曲霉因其在发酵过程中可分泌大量水解酶类,被作为传统酿造食品的常用菌株。其分泌的水解酶主要包括蛋白水解酶和糖类水解酶。这两类酶分解底物产生的氨基酸、多肽、寡糖、单糖等小分子物质,是传统发酵食品风味的主要来源。具有优良产酶性能的米曲霉菌株对发酵工业有重大意义。近年来,米曲霉由于其强大的表达外源蛋白的能力越来越被重视。与毕赤酵母和大肠杆菌相比,米曲霉具备更强大的翻译后修饰的功能;与植物及昆虫相比,米曲霉对生长环境的要求更低,生长周期更短,是表达外源蛋白的理想宿主。本文对本实验室现有的米曲霉菌株进行了对比研究,主要研究内容如下:1.不同米曲霉菌株培养特性对比分析通过平板培养对八株米曲霉菌株进行了产孢量的比较,接种量为10~5个孢子时,每株菌每个平板都能收集到10~7数量级的孢子。其中,H4的产孢量最高,平均可达7.9×10~7个孢每平板,是产孢量最少的B菌株均值的4.72倍。在液态发酵条件下(接种量10~5个/mL,28℃180 rp...  (本文共67页) 本文目录 | 阅读全文>>

江西科技师范大学
江西科技师范大学

盐胁迫下米曲霉的应答机制研究

米曲霉是一种常见的发酵用微生物,广泛应用于制作豆豉及酿造酱油中。酱油酿造根据发酵工艺的不同,可分为无盐固态发酵、低盐固态发酵和高盐稀态发酵,现在较为常用的为后两种。盐分的存在不仅可以抑制杂菌的生长,还与酱油特殊风味的形成密切相关,但是发酵时的盐分处理同时也会对米曲霉菌株的生长产生抑制作用,因此有必要对米曲霉进行进一步的优化。目前为止,关于米曲霉在盐胁迫下的应答机制鲜有报道,有必要对其进行更深入的研究,为改造和选育更适合应用的米曲霉菌株提供一定的实践依据。基于上,本课题进行了以下方面的研究:1.盐胁迫下米曲霉的生长及代谢物质分析:接种新鲜米曲霉孢子于含0%,5%,10%,15%氯化钠的PDA培养基中,30℃,培养72 h,以盐浓度0%为对照,观察米曲霉的生长情况,测定米曲霉的干生物量和孢子数量。结果显示,对照组干生物量一直处于同时间点最高值,盐胁迫导致了米曲霉生物量的下降,特别是48 h后,干生物量的变化更加明显,盐浓度越高,抑制...  (本文共106页) 本文目录 | 阅读全文>>

哈尔滨工业大学
哈尔滨工业大学

米曲霉发酵豆渣制备大豆多肽和多糖

豆渣是大豆制品加工主要副产物,豆渣由于纤维素含量高,口感粗糙,含有胰蛋白酶、皂素和血凝素等抗营养因子,一直作为废弃物。豆渣中含有大豆蛋白以及丰富的膳食纤维,合理有效地利用豆渣,其经济效益和较大。本文以豆渣为原料,利用球磨机对豆渣进行细化处理,采用双酶法部分水解豆渣中大豆蛋白和膳食纤维,以部分水解豆渣为底物进行米曲霉发酵,利用米曲霉分泌蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、糖化酶等多种酶将豆渣中蛋白质和不溶性膳食纤维等物质水解成可溶性多糖、肽等小分子化合物。对酶制剂的选择、酶解条件、米曲霉发酵特性、发酵工艺、发酵液脱色进行了研究。豆渣细化处理时,向研磨罐中放入过40目筛的40 g湿豆渣,球磨机的转速恒定为300 r/min,球料比为10:1,研磨时间为4 h,得到的豆渣中位粒径为462μm用于后续实验。从食品工业中常用蛋白酶和纤维素酶中筛选出Alcalase碱性蛋白酶和复合纤维素酶作为豆渣蛋白和纤维素水解酶,以大豆蛋白水解率和纤维素水解率为评...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

甘肃农业大学
甘肃农业大学

米曲霉固态发酵条件优化及其发酵产物对肉仔鸡日粮养分利用的影响

本试验旨在通过筛选高产蛋白酶米曲霉及其固态发酵条件优化,获得高酶活固态发酵物,并应用于肉仔鸡饲粮,为解决提高肉仔鸡日粮蛋白等养分利用提供技术手段。共包括3个试验。试验一:高产蛋白酶米曲霉菌株的筛选经过对多个米曲霉孢子样品进行平板初筛测定产圈、固态发酵复筛测定酶活力,获得两株分别高产酸性蛋白酶米曲霉菌株0-8和高产中性蛋白酶米曲霉菌株2-9。试验二:米曲霉固态发酵条件优化采用单因素分析法和正交试验设计,对其两株米曲霉产蛋白酶固态发酵条件进行优化。结果表明:产酸性蛋白酶0-8最佳发酵条件为:发酵温度30℃、发酵时间66 h、初始水分47.4%、接种量1.5×10~7个/mL、麸皮含量80%、玉米浆/豆粕1/3,优化后酸性蛋白酶活力达到1 4416.64 U/g,比优化前提高了61%;产中性蛋白酶2-9最佳发酵条件为:发酵温度30℃、发酵时间60 h、初始水分47.4%、接种量1.5×10~7个/mL、麸皮含量80%、玉米浆/豆粕3/...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>