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嵌合抗体轻链基因在家蚕细胞中的重组与表达

用家蚕修饰型核多角体病毒为载体,在家蚕细胞获得人鼠嵌合的抗入小细胞肺癌抗体轻链基因的表达.PCR和Sou  (本文共6页) 阅读全文>>

上海交通大学
上海交通大学

重组抗CD52抗体的结构、功能以及两种发酵工艺的对比研究

抗体药物因其靶点明确、毒副作用小、治疗效果明确,已成为生物医药领域创新的核心方向,当前针对抗体药物的研究项目已经达到在研生物技术药物的70%,广泛应用在治疗肿瘤、自身免疫等疾病。其中抗CD52抗体药物已经在国外被批准用于慢性淋巴细胞白血病和多发应硬化症的治疗,疗效显著,但尚未在国内上市。批次补料和连续灌注细胞培养是当前生产抗体或重组蛋白药物的主要发酵工艺。批次补料培养具有易放大、操作简便等优势,因当前细胞株蛋白表达水平普遍较高,被大部分已上市的抗体药物采用。连续灌注培养工艺由于连续收获培养上清液并且补充新鲜培养液,因此细胞的培养环境趋于恒定,具有细胞密度高、培养时间长、蛋白质量稳定、单位体积蛋白产率高等特点。蛋白质结构不稳定的酶类或重组凝血因子等产品主要采用此工艺,但有少数抗体药物也采用连续灌注工艺生产。本研究对自主开发的抗CD52抗体进行了全面的质量和活性研究,并对比了批次补料和连续灌注两种培养工艺生产该抗体药物的产量和蛋白质...  (本文共138页) 本文目录 | 阅读全文>>

福州大学
福州大学

乳腺癌雌激素受体(ERα)抗体的制备与应用

目的:克隆ERα基因,构建重组质粒,诱导表达ERα蛋白,预处理后免疫Balb/c小鼠,制备ERα单克隆抗体,研究其在免疫组化上的应用效果,制备具有免疫组化诊断价值的ERα单克隆抗体。方法:培养ERα高表达的T47D细胞,提取总RNA,用PCR技术扩增ERα基因,通过酶切、酶连方法构建pET-27b-ERα重组质粒。重组质粒转化至Rosetta表达菌中,IPTG诱导蛋白表达。用亲和镍柱分离纯化ERα重组蛋白。EDTA抗原修复液热修复蛋白作为免疫原免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,采用ELISA和免疫组化相结合的方法进行单抗的筛选和评估。运用亚型鉴定试剂盒通过ELISA法测定单抗亚型。腹水诱导制备单抗并用重力层析柱纯化抗体,SDS-PAGE检测抗体纯度。运用免疫组织化学检测技术评估单抗的应用价值。结果:1、成功提取总RNA,pET-27b-ERα重组质粒构建成功,0.5mMIPTG诱导6h后大量表达...  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

江南大学
江南大学

人源哺乳动物细胞重组抗体表达系统的构建及相关因子筛选

生物药物(biopharmaceuticals)是一类在生物体或活体细胞中生产的生物活性药物。与传统的小分子药物相比,以单克隆抗体为代表的生物药物具有高亲和性、高靶向特异性和低副作用等优点。近年来,重组型免疫球蛋白日益成为治疗癌症和免疫性疾病等顽固性病症的重要药物。与其他分泌型蛋白一样,分泌型重组免疫球蛋白同样具有一条由内质网(ER)经高尔基体(Golgi)最终输送至胞外的分泌途径。期间多种因子参与介导了免疫球蛋白的糖基化修饰、空间折叠、结构重组及转运等多个步骤。本研究旨在构建一个可监控重组型抗体表达和分泌的哺乳动物细胞表达系统,基于这一系统运用基因诱捕技术(gene-trapping)筛选参与抗体表达、分泌相关的因子。人源抗鸡蛋清溶菌酶抗体(HyHEL10)是一种晶体结构已知且表征良好的抗体,以鸡蛋清溶菌酶(HEL)作为相应抗原。本研究采用HyHEL10作为模式抗体在HEK293细胞株和人源单倍体HAP1细胞株中表达。实验将增...  (本文共53页) 本文目录 | 阅读全文>>

《现代预防医学》2003年04期
现代预防医学

抗腮腺炎病毒抗体轻链基因的克隆及重组表达载体的构建

目的 :构建抗腮腺炎病毒抗体轻链基因重组表达载体。方法 :从腮腺炎患者和腮腺炎抗体 Ig G阳性正常人群的淋巴细胞中提取总 RNA,逆转录成 c DNA。用相应的引物进行 PCR,扩增出轻链 κ和 λ基因 ,经 Sac I和 Xba I双酶切后 ,分别和噬粒载体 p Com b3连接 ,再经电穿孔转化大肠杆菌 XL1- blue菌株 ,将轻链基因克隆入载...  (本文共2页) 阅读全文>>

《第四军医大学学报》2000年05期
第四军医大学学报

鼠源性抗人成骨肉瘤抗体轻链基因克隆及其结构分析

目的 扩增与人成骨肉瘤细胞特异结合的鼠源性单克隆抗体轻链基因 ,并对其基因序列进行分析 .方法 用RT- PCR方法从分泌鼠源抗人成骨肉瘤单克隆抗体的杂交瘤细胞 ( 7F6 B)扩增出抗体轻链基因 ,克隆到 p GE...  (本文共3页) 阅读全文>>