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大鼠海马细胞质膜的分离及其蛋白质组学分析

运用差速离心和连续蔗糖密度梯度离心的方法分离纯化成年大鼠海马组织细胞质膜并用Western印迹对质膜样品进行检测.结果表明,在蔗糖密度梯度离心介质中,膜片主要集中于蔗糖浓度为32%~42%的区段(密度约1.13~1.18),其次是20%~25%(密度约1.08~1.10)的区段.39%(密度约1.1  (本文共11页) 阅读全文>>

湖南师范大学
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大鼠海马细胞质膜蛋白质组学研究及二维色谱在毒素组学研究中的应用

海马(hippocampus)是大脑颞叶内侧的一个脑结构,是哺乳动物学习和记忆的重要结构区。运用差速离心和连续蔗糖密度梯度离心的方法分离纯化成年大鼠海马组织细胞质膜并用Western blotting对质膜样品进行检测。结果表明,在蔗糖密度梯度离心介质中,膜片主要集中于蔗糖浓度为32%~42%的区段(密度约1.13~1.18),其次是20%~25%(密度约1.08~1.10)的区段。39%(密度约1.17)层面上质膜浓度和纯度最高。一维SDS-PAGE分离和CapLC-MS/MS分析后,通过数据库搜寻从大鼠海马组织细胞质膜样品中共鉴定出135种蛋白质,其中质膜蛋白和与膜相关的蛋白质共70种(占51.9%),主要包括Na~+/K~+-ATPase、Glutamate/aspartate transporter、Lipophilin、GLAST 1a等。为研究海马组织细胞的功能和大鼠海马组织细胞质膜蛋白质数据库的建立积累了有价值的资...  (本文共106页) 本文目录 | 阅读全文>>

湖南师范大学
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蛋白质组学研究相关技术的发展及其在大鼠海马细胞膜蛋白质组研究中的应用

蛋白质组学研究主要依赖三大技术:蛋白质组分离技术、蛋白质组鉴定技术以及利用生物信息学对鉴定的蛋白质进行结构和功能分析与预测。蛋白质组学的发展既为技术所推动也受技术所限制,蛋白质组学研究成功与否,很大程度上取决于其技术方法水平的高低,因此发展高通量、高灵敏度、高准确性的研究技术平台即蛋白质组学方法学研究是当今乃至相当一段时间内蛋白质组学研究中的主要任务之一。本文在蛋白质组学方法学研究方面进行了一系列探索,首先建立并优化了肽质量指纹图(PMF)分析方法;在此基础上对MALDI-TOF源后衰变(PSD)从头测序(de novo sequencing)方法进行了探索,在比较了化学辅助磺酸化修饰试剂3-磺酸丙酸N-羟基琥珀酰胺酯后,提出了一种新型的化学辅助磺酸化修饰试剂磺基异硫氰酸苯酯(SPITC),对包括缓冲液、盐浓度、反应温度和时间在内的各种衍生条件进行了摸索与优化,并将该方法成功地运用于中药复方861对肝星状细胞影响的蛋白质组学研究...  (本文共200页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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雄激素受体细胞质膜转移机制及其功能的研究

雄激素受体(Androgen receptor,AR)是I型核受体家族成员,在男性性特征发育及表型维持中发挥着重要的作用。在雄激素的不存在的情况下,雄激素受体处于非激活状态与热启动蛋白相互作用定位于细胞质中,在雄激素的作用下,雄激素受体发生构象改变,形成二聚体进而转入细胞核中,激活靶基因的表达,诱导细胞增殖,分化等生理活动,这样的通路被认为是雄激素受体经典通路,也称为基因组雄激素受体通路。越来越多的研究发现雄激素受体可以在几分钟内快速的应答雄激素受体,而这种快速的应答不依赖于雄激素受体的细胞核转移,不依赖于靶基因的表达,因而把这样一种雄激素受体通路称为非基因组雄激素受体通路。通过非基因组雄激素受体通路,雄激素受体可以激活PI3K-AKT,ERK,Src等信号传导通路等。近来随着对雄激素受体非基因组功能研究的深入,科研人员发现AR除了发生细胞核转移,同时AR也可在雄激素的作用下发生快速的细胞质膜转移,而这种AR的细胞质膜转移与PI...  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

上海交通大学
上海交通大学

NRAS细胞膜转移抑制剂的发现及机制研究

RAS家族包含三种RAS基因,可编码NRAS,HRAS,KRAS4A和KRAS4B四种蛋白,差异性主要存在于蛋白质的羧基末端。RAS癌基因突变,尤其是KRAS和NRAS两种亚型,在人类肿瘤中十分常见。但由于RAS蛋白的GTP水解酶活性具有“自我关闭”作用,且与GTP结合的能力特别强,所以其本身很难作为癌症治疗中的靶点。因此,在研发针对RAS相关肿瘤的治疗方法时,探索其他间接途径来抑制RAS癌信号转导就非常关键。在本研究中,我们基于RAS依赖性的细胞设计了一种靶向RAS突变的化学生物学筛选方法。由于RAS蛋白的生物学活性特别依赖其正确的蛋白质翻译后脂质修饰,我们筛选了一个生物活性脂类化合物库,得到了以N-花生四烯酰多巴胺(N-arachidonoyl dopamine,NADA)为代表的多个可以有效杀死RAS转化细胞的内源性大麻素/内源性辣椒素类化合物。分子结构与生物活性相关性分析证明NADA的抗RAS活性依赖其结构的完整性,且与...  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建师范大学
福建师范大学

基于光学显微成像技术的乳腺肿瘤细胞质膜微结构特性研究

肿瘤细胞的发展、迁VI移和入侵的过程都伴随着细胞质膜特性的改变,而脂筏是细胞质膜上富含胆固醇和鞘脂类的、动态的、不均匀的微结构域,在细胞的信号传导和运输中起着重要的作用。因此,研究不同肿瘤细胞与其质膜脂筏特性之间的关系具有重要意义,为脂筏结构和功能的异常可能导致的许多疾病提供研究基础。本文利用光学显微术结合环境敏感探针研究不同肿瘤细胞质膜的特性以及胆固醇对其特性的影响。首先,通过激光扫描共焦显微镜(LSCM)结合Di-4-ANEPPDHQ探针研究三种乳腺癌细胞MCF-10A、MCF-7和MDA-MB-231的迁移能力和质膜广义极化(GP)值之间的关系,结果显示迁移能力越强的细胞,其质膜的GP值越高。接着,通过胆固醇损耗试剂甲基-β-环糊精(MβCD)损耗胆固醇,研究胆固醇对三种细胞迁移能力的影响。实验表明胆固醇含量较高的乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7对胆固醇消耗试剂更敏感,正常上皮细胞则对其具有一定的抵抗性。并且,上...  (本文共92页) 本文目录 | 阅读全文>>

《Acta Botanica Sinica》1997年05期
Acta Botanica Sinica

玉米精细胞质膜特异蛋白的纯化

在获得6个品种的玉米(Zea mays L.)花粉精细胞后,采用N-hydroxysuccinimido-biotin(NHS-biotin)标记其外膜蛋白,并通过SDS-PAGE和Western blotting对比了其中主要标记蛋白,发现其主要蛋白带差异并不显著,主要标记蛋...  (本文共5页) 阅读全文>>