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构建胆固醇氧化酶的短杆菌基因文库

以内切酶Sau3AI部分水解产胆固醇氧化酶短杆菌的染色体DNA,以质粒pUC18为载体,JM  (本文共3;页) 阅读全文>>

华中农业大学
华中农业大学

灰色链霉菌ATCC14811胆固醇氧化酶基因的分子生物学研究

胆固醇氧化酶是胆固醇代谢的关键酶之一,它催化胆固醇氧化及异构反应,生成胆甾-4-烯-3-酮和过氧化氢。胆固醇氧化酶被广泛应用于临床各种样本胆固醇含量测定、制药工业及食品加工等方面。本实验设计了简单易行的链霉菌胆固醇氧化酶活性测定指示平板,结合用链霉菌SA-COO(Streptomyces sp.strain SA-COO)胆固醇氧化酶基因(choA)为异源探针的Southern杂交,确证了灰色链霉菌ATCC14811(Streptomyces griseus ATCC14811)具备产生胆固醇氧化酶的能力。为了获得胆固醇氧化酶基因,以大肠杆菌-链霉菌双功能柯斯质粒pHZ1357为载体,构建了灰色链霉菌ATCC14811的基因组文库。通过以choA为探针的原位杂交,获得了两个阳性重组子4D3(pHZ1140)和20D2(pHZ1141)。pHZ1140和pHZ1141向变铅青链霉菌的导入赋予了寄主产生胆固醇氧化酶特性。对pHZ11...  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

华东理工大学
华东理工大学

嘌呤核苷磷酸化酶合成利巴韦林的应用研究

利巴韦林是具有广谱抗病毒的核苷类药物,因其具有高疗效、低毒性、不易产生耐药性等特点而被广泛应用于多种病毒疾病治疗中。酶法合成是利用嘌呤核苷磷酸化酶催化嘌吟核苷与TCA反应生成利巴韦林,具有巨大的工业前景。论文首先对可表达PNPase的乙酰短杆菌的培养条件进行优化,并确定了最佳蛋白胨来源,同时利用响应面法在保证转化率的前提下将菌浓提高到16.8 g/L,提高了25.4%,同时价格降低了28.3%。将三条分别来源于枯草芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌和乙酰短杆菌的基因序列与pET20b载体连接构建重组质粒,并在E.coli BL21(DE3)中高效表达得到酶BsPNP、BhPNP和BaPNP。通过对三个重组菌的表达条件进行优化,使目的蛋白表达都占总蛋白的50%以上。利用镍柱亲和层析一步纯化目的蛋白,通过SDS-PAGE检测确认得到纯酶。通过对三个蛋白酶的酶学性质进行探究,确定上述三个蛋白酶的最适作用温度分别是65 ℃,75 ℃和65 ℃,最适...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

《天津化工》2016年01期
天津化工

超声波转化方法将外源性质粒导入甾短杆菌的研究

目的:建立甾短杆菌的高效超声波转化方法,为利用甾短杆菌重组表达功能基因提供方法基础。方法:采用超声波诱导的方法把外源DNA转化进甾短杆菌基因组中。通过对甾短杆菌生长状态,超声波作用条件等影响因...  (本文共4页) 阅读全文>>

《江苏调味副食品》2006年03期
江苏调味副食品

617短杆菌发酵生产谷氨酸的研究历程

为纪念我国发酵法生产味精40周年,该文简述了617短杆菌发酵生产谷氨酸的研究过程,介绍了利用菌株29...  (本文共3页) 阅读全文>>

《技术与市场》2000年06期
技术与市场

短杆菌生成蛋白质

日本生物学家鹈高重三与须田酱油公司合作,利用芽孢杆菌大量制造有用蛋白质上皮细胞增殖因子,现已达到工业化...  (本文共1页) 阅读全文>>

《微生物学报》1985年03期
微生物学报

史氏甲烷短杆菌的分离和生理生化特性

采用改良的Hungate厌氧操作技术,从成都市狮子山污泥富集样品中分离到H-13菌株。该菌株革兰氏反应弱阳性,不运动、不形成芽孢。H-13菌株为两端略呈钝形的短杆菌,在H_2/CO_2及甲酸基质上一般成对出现连成双杆菌,偶见链状细胞。菌落圆形,半透明,微凸起,稍带浅黄色。H-13菌株可利用H_2/CO_...  (本文共7页) 阅读全文>>