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胚胎干细胞建系方法

胚胎干细胞具有的独特特征———分化全能性是生物学各研究领域多年来的热点之一。胚胎干细胞独特的生物学特征在生殖细胞与体细胞及动物个体之间建  (本文共4页) 阅读全文>>

中国农业大学
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猪胚胎干细胞(EG)建系影响因素的研究

1.本实验以中国近交系五指山小型猪(WZSP)和微型白猪为材料,先后从27头猪采集了312枚早期胎儿用于进行猪胚胎干细胞(EG)建系影响因素研究,得出如下结论:(1)d26-28猪胎儿可用于制作胎儿成纤维细胞。制作饲养层时,STO、MEF~1细胞用10μg/mL丝裂酶素C处理1.75h~2h;PEF细胞用丝裂酶素C处理2.25h~2.5h。(2)分别收集d27 WZSP和微型白猪胎儿,实验结果证明,WZSP和微型白猪在EG细胞培养方面没有显著性差异(P>0.05),都可以用来作为EG细胞建系的材料。(3)分别采集d26、d27、d28胎儿,在相同条件下培养,实验结果证明,d26、d27、d28胎儿PGC细胞培养效果差异不显著(P>0.05)。(4)采集d27胚胎,分别放在两种培养液中培养[培养液1:DMEM(丙酮酸钠)+15%FCS+1%L-谷氨酰胺+1%MEM-非必需氨基酸+1%Penicillin-Streptomycin+...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
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山羊胚胎干细胞和胚胎生殖细胞的分离培养与鉴定

山羊胚胎干细胞(ESCs)和胚胎生殖细胞(EGCs)是制备乳腺生物反应器理想的候选细胞,然而至今仍没有成功建系的报道。本研究选用体内来源的关中奶山羊胚胎和胎儿为试验对象,参照小鼠和人ESCs和EGCs报道的建系方法,系统比较了不同培养条件和传代方法对分离培养不同发育时期山羊胚胎ESCs和胎儿EGCs的影响,主要获得以下结论:1.超排处理45只山羊(42只关中奶山羊,3只波尔山羊),共得到可用胚胎341枚,其中4~16细胞胚胎26枚,桑椹胚144枚,囊胚108枚,孵化胚63枚。在以“桑椹胚全胚、去带桑椹胚、囊胚全胚、ICM和胚盘阶段的胚胎”为起始材料分离山羊类ESCs的试验中,发现“去带桑椹胚、ICM和胚盘阶段的胚胎”分离效果较佳。“桑椹胚全胚和囊胚全胚”在接种饲养层后,贴壁率较低(如囊胚全胚贴壁率为38.1%,内细胞团贴壁率为76.5%,二者差异显著,P﹤0.05),不适宜直接作为分离ESCs的起始材料。2.将ICM培养于小鼠胎...  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
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小鼠胚胎干细胞建系新方法及TFAG促进鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的初步研究

目的 利用小鼠胚胎着床初期1~3天子宫组织块培养分离内细胞团,探讨获得胚胎干细胞的可能性及白蒺藜醇甙(TFAG)对小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法 分离小鼠胚胎着床初期1~3天(孕4.5~6.5天)小鼠子宫,剪碎后进行组织块培养,2天内分离内细胞团,以后按常规的胚胎干细胞培养及传代方法进行传代。分化诱导实验是将小鼠胚胎干细胞在无白血病生长抑制因子(LIF)及无MEF饲养层条件下形成类胚体(EB),将EB打散成单细胞,分组添加维甲酸(RA)及TFAG,种植于粘附性的组织培养皿中,诱导分化4天,进行细胞形态观察及苔盼蓝活细胞计数;再在无RA及TFAG的条件下培养2天后用抗小鼠NF200及GFAP抗体进行免疫组化鉴定。结果 用这种方法已建立一株小鼠胚胎干细胞系,传至第10代,AKP染色强阳性,RT-PCR证实Oct-4表达强阳性。分化诱导实验中,各组均加相同浓度RA,其浓度为5×10~(-7)mol/L,不加TFAG的对照组...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

甘肃农业大学
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猪胚胎干细胞的分离、培养、鉴定和分化的研究

胚胎干细胞是从哺乳动物的早期囊胚内细胞和原始生殖细胞中分离、体外培养所获得的多能性干细胞。多能干细胞是研究哺乳动物胚胎早期发育、细胞分化、基因调控等发育生物学基本问题的理想模型,在组织工程学,药理学、家畜品种改良、动物转基因和动物克隆等方面具有重要的研究和应用价值。嵌合体是鉴定EG细胞多能性的方法之一,同时嵌合体的制作,也是EG细胞在研究发育遗传以及细胞分化过程中基因表达和调控的有效手段。精原干细胞是成体干细胞中唯一贯穿于整个生命过程中并能够自我更新和传输遗传基因到后代的细胞,对于雄性生殖力的恢复和生殖系基因修复精原干细胞具有重要的意义。本文以猪为试验材料,通过多方面的研究,对其原始生殖细胞建立EG细胞系的影响因素进行了研究,并就猪EG细胞的鉴定和体外诱导分化的方法进行了探索;通过对猪嵌合体的制作及对其进行的DNA分析,进一步证实EG细胞具有胚胎干细胞的多能性;此外,本文对猪精原干细胞的分离和培养进行了探讨。通过研究,我们获得了...  (本文共100页) 本文目录 | 阅读全文>>

甘肃农业大学
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山羊类胚胎干细胞的分离与培养

山羊胚胎干细胞(ESCs)和胚胎生殖细胞(EGCs)是克隆动物、转基因动物、制备生物反应器和组织工程等理想的候选细胞,然而至今没有成功建系的报道。本研究选用马头山羊为试验对象,在其繁殖季节,使用CIDR孕激素海绵栓诱导同期发情,使用OVAGENTM进行超数排卵处理,手术法体外冲胚。获取胚胎后参照小鼠和人ESCs建系的方法,系统比较了不同培养条件和传代方法以及血清成分对分离、培养山羊ESCs的影响,并对得到的细胞进行了相关检测和鉴定,主要获得以下结论:1.应用CIDR阴道诱导同期发情,在撤栓后的24~36h羊只出现发情高峰,0~72h发情率为95.00%。对采用不同剂量的OVAGENTM的三个试验组的山羊进行超数排卵处理,结果表明注射160mg试验组所获得的胚胎数量最多。超排共获得胚胎158枚,其中84枚胚胎鉴定为囊胚、B级以上,可用于山羊胚胎干细胞分离与培养试验。2.试验以DMEM/F-12+15%KSR+0.1mmol/Lβ-...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>