分享到:

耳蜗移植神经干细胞的培养和鉴定

目的以SD孕鼠的胎鼠海马组织为原材料来分离培养神经干细胞,为后续干细胞移植实验奠定基础。方法分离3只孕14~15天的SD大鼠胚胎海马组织,用无血清培养技术悬浮培养神经干细胞,测量神经干细胞球的数量和直径。用免疫组化荧光技术检测其巢蛋白(Nestin)的表达;掺入5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu),并用免疫荧光双标技术观测神经干细胞的增殖状况。采用荧光染料Hoechest33342标记神经干细胞,然  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国耳鼻咽喉头颈外科》2009年01期
中国耳鼻咽喉头颈外科

C57BL/6-gfp小鼠嗅球神经干细胞的培养鉴定及耳蜗核移植

目的建立C57BL/6-gfp小鼠嗅球神经干细胞体外培养的方法,并初步应用于大鼠耳蜗核定位移植。方法培养C57BL/6-gfp小鼠胚胎嗅球神经干细胞,传代并进行分化实验...  (本文共3页) 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

神经干细胞和新生大鼠Corti氏器组织联合培养的实验研究

目前治疗重度感音神经性耳聋的主要方法还是人工耳蜗植入。螺旋神经节神经元的完整性是人工耳蜗植入的前提并直接关系着植入后的临床效果。对于重度感音神经性耳聋的患者,不管导致疾病的诱因为何,一般都有不同程度的内耳螺旋神经节神经元的损伤或退化,所以如何恢复内耳螺旋神经节神经元的完整性为耳科学的一大挑战。神经干细胞(neural stem cells,NSCs)具有良好的组织相容性和多向分化潜能,在胚胎和成年啮齿类动物中广泛存在。神经干细胞不仅可分化为神经系统的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,而且,体内移植后对神经系统损伤和疾病均有一定的修复作用。研究表明,控制神经干细胞不断增殖和分化的因素十分复杂,常是多种因素共同作用的结果。如何能使神经干细胞向特定的细胞分化,仍是目前研究的热点。我们根据神经干细胞多潜能分化的生物学特征,提出了是否可以在体外模拟内耳的环境来诱导神经干细胞分化为螺旋神经节神经元的设想。本课题通过神经干细胞和新生一天SD...  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中科技大学
华中科技大学

重组腺病毒(Ad-GFP)感染胚胎大鼠神经干细胞及耳蜗移植的实验研究

第一部分胚胎大鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记目的探索胚胎大鼠神经干细胞(Neural stem cells ,NSCs)的分离培养、鉴定及标记的方法。方法分离胚胎大鼠海马组织,用无血清培养技术培养NSCs,免疫组化荧光技术检测其巢蛋白(Nestin)的表达;5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)掺入试验,并用免疫荧光双标技术观测神经干细胞的增殖状况。采用荧光染料Hoechest33342标记NSCs并诱导其分化,用神经元特异性烯醇化酶(Neuron Specific Enolase, NSE)胶质纤维酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein, GFAP)免疫组化荧光染色鉴定分化细胞。结果1.获得了大量未分化呈巢状悬浮生长的NSCs团,并能分化为神经元和星型胶质细胞,且经传代培养10代后仍具干细胞特性。2.荧光染料的标记率可达97%,细胞传10代后荧光亮度无明显衰减,并且分化后的细胞核中仍有荧光表达。结论...  (本文共90页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

耳蜗雪旺细胞来源的Wnt1对耳蜗移植干细胞分化的影响及其分子机制研究

1目的神经干细胞(neural stem cells, NSC)的移植为神经系统退行性疾病和损伤的治疗提供了新的思路,但是移植入内耳的神经干细胞向神经元分化的效率很低,这成为移植的外源性神经干细胞替代治疗螺旋神经神经元(spiral ganglion neurons, SGNs)变性的主要障碍。在本研究中,我们验证了耳蜗螺旋神经元损伤后的局部微环境更有利于移植的外源性神经干细胞向神经元方向分化,并初步阐明了其分子机制。2方法我们通过向耳蜗圆窗龛局部给予药物ouabain建立大鼠螺旋神经元损伤动物模型。然后将分离、培养的神经干细胞移植进入正常、及螺旋神经元损伤后的耳蜗鼓阶。用免疫荧光染色和实时定量RT-PCR等技术来鉴定螺旋神经元损伤后内耳局部微环境对移植的神经干细胞分化的的影响,并初步阐明其分子机制。最后我们使用transwell共培养系统通过体外实验验证我们的假设。3结果通过将外源性干细胞植入螺旋神经元损伤的动物耳蜗内,我们发...  (本文共100页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

神经干细胞耳蜗移植的相关研究

第一部分 新生豚鼠海马神经干细胞的培养及鉴定目的 神经干细胞(NSC)的研究已逐渐成为国内、外基础及临床医学各专业的重要研究课题。NSC是一种成体干细胞,存在于胚胎和成年哺乳动物中枢神经系统的多个区域,属多能干细胞,在一定的微环境中具有自我更新和向神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞分化的能力,且具有极强的可塑性,利用NSC进行细胞治疗或基因治疗有很好的临床应用前景。豚鼠在耳科学基础研究中具有独特的优势,并得到广大耳科学研究者的广泛应用,建立一种简便、可行的豚鼠NSC培养方法将为NSC在耳科学领域研究的深入开展提供细胞支持,但目前关于豚鼠NSC的培养方法介绍的并不多。本实验旨在建立一种较为简便、可靠的豚鼠NSC分离、培养方法,为耳科学领域NSC的进一步深入研究提供帮助。材料与方法 分离新生豚鼠海马组织进行NSC的原代、传代培养及诱导分化培养,倒置显微镜下观察培养细胞的形态特征,传代培养的细胞行MTT检测,了解其增殖情况,培养的细胞...  (本文共90页) 本文目录 | 阅读全文>>