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大肠杆菌β-D-半乳糖苷酶的定位突变及突变酶的动力学性质

利用人工合成的寡核苷酸探针,将编码大肠杆菌β-D-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)的Lac Z基因中537位Glu密码子GAA分别用GAC(Asp)、CAA(Gln)、GTC(Val)来替代,替代后的突变酶的催化活性显著降低.同天然β-D-半乳糖苷酶相比,作用于ONPG底物时,突变酶的k_(cat)  (本文共7页) 阅读全文>>

《工业微生物》2004年03期
工业微生物

碳源对K.fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶合成的影响

探讨了碳源对脆壁克鲁维酵母 (Kluyveromycesfragilis)LFS 86 11生长、β D 半乳糖苷酶合成的影响及碳源对该酶合成的诱导作用。脆壁克鲁维酵母 (K .fragilis)LFS 86 11生长与 β D 半乳糖苷酶合成同步。该菌株生长和产酶的最适碳源...  (本文共4页) 阅读全文>>

中国农业大学
中国农业大学

米黑根毛霉、巴伦葛兹类芽孢杆菌半乳糖苷酶基因的表达及重组酶性质研究

微生物源的半乳糖苷酶在食品、医药、饲料、和环保等工业中有着非常广阔的应用前景,近年来备受研究者们的关注。本文主要研究了米黑根毛霉和巴伦葛兹类芽孢杆菌半乳糖苷酶基因的克隆、表达及重组酶酶学性质,主要结果如下:成功将米黑根毛霉(Rhizomucor miehei)中α-半乳糖苷酶基因(RmgalB)克隆、表达至毕赤酵母中。RmgalB属于糖苷水解酶36(GH36)家族,开放阅读框(ORF)为2241 bp,编码746个氨基酸且含有2个内含子。重组αα-半乳糖苷酶(RmgalB)经5L发酵罐高密度发酵后酶活力为1953.9U mL-1,为目前报道最高值。RmgalB为同源四聚体结构,单亚基蛋白分子量为83.1kDa,比酶活为505.1 U mg-1。RmgalB的最适温度及最适pH分别为55℃和5.5,该酶在pH 5.5-9.5范围内及在55℃以下保持稳定。RmgalB能完全水解蜜二糖、棉籽糖和水苏四糖,还能水解豆饼中的棉籽寡糖。酶学...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

福州大学
福州大学

特殊环境微生物半乳糖苷酶基因的克隆、表达与性质研究

半乳糖苷酶是降解蜜二糖、乳糖和棉籽糖等含有半乳糖苷键的糖苷水解酶,该酶在食品、医疗和饲料等行业具有重要的应用。特殊环境来源的微生物有环境适应性,其产生的半乳糖苷酶具有潜在的特殊性质。本课题从盐碱湖、红树林和火焰山分离菌中克隆得到4个半乳糖苷酶基因,其中3个半乳糖苷酶基因在大肠杆菌或酵母中得到异源表达,同时对表达的重组半乳糖苷酶进行纯化和酶学性质研究。主要内容如下:1、以豆粕或乳糖为唯一碳源的筛选培养基,从盐碱湖、红树林和火焰山分离菌筛选到7株产半乳糖苷酶微生物。利用简并引物从3株产酶微生物克隆到4个半乳糖苷酶基因片段,这些片段的氨基酸序列与已知半乳糖苷酶的最高一致性在74%~100%。2、采用TAIL-PCR或同源克隆的方法获得4个半乳糖苷酶基因的全长,设计特异性引物,PCR扩增4个半乳糖苷酶基因,并进行生物信息学分析:半乳糖苷酶基因agalSL3-GH27、bgalSL3-GH42、agalMF5-GH27和bgalFM3-G...  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

江南大学
江南大学

β-D-半乳糖苷酶的发酵生产、分离纯化和性质研究

β-D-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)属于水解酶,催化半乳糖基转移反应生成低聚半乳糖。食品工业中应用该酶催化乳糖转半乳糖苷基水解生产低聚半乳糖的乳制品。β-D-半乳糖苷酶在乳品工业中有着广泛的应用。β-半乳糖苷酶俗称乳糖酶,不仅能水解乳糖生成半乳糖和葡萄糖,而且具有转糖基活性,是一种重要的糖苷水解酶,在食品、药品和分析化学等领域有重要作用。今年来,随着糖生物学的发展,β-半乳糖苷酶逐渐成为乳糖水解和低聚糖合成的重要工具酶,被用于各种糖基化合物。本实验室筛选出一株马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)SK 16.001,利用发酵的方法可以获得较高转苷活力的β-D-半乳糖苷酶,具有工业化应用潜力,有必要对产β-D-半乳糖苷酶的发酵条件进行优化,并对该酶进行纯化,以进一步研究其催化机制及酶反应动力学参数等。利用马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)SK 16.001进行发酵培...  (本文共43页) 本文目录 | 阅读全文>>

《食品科学》2020年02期
食品科学

产β-D-半乳糖苷酶马克斯克鲁维酵母的分离鉴定及其产酶特性

从藏灵菇中分离筛选到的一株高产β-D-半乳糖苷酶菌株ZX-5,经ITS DNA序列分析,鉴定为马克斯克鲁维酵母。对产酶培养基的最佳碳源和氮源优化结果为半乳糖2.0%,胰蛋白胨1.0%;产酶优化条件:温度30℃,培养基初始pH 6.5,装液量30%,转速100 r/min,接种量2.0%,发酵36 h。粗酶液酶活力为2.60 U/mL;...  (本文共8页) 阅读全文>>