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关键基因的修饰对枯草芽孢杆菌尿苷合成的影响

【目的】探究磷酸核糖焦磷酸(PRPP)合成酶(prs)和氨甲酰磷酸合成酶(pyr AA/pyr AB)的点突变,以及异源5′-核苷酸酶(sdt1)的过表达,对枯草芽孢杆菌尿苷生物合成的影响。【方法】依据推断的变构位点,分别在prs基因和pyr AB基因编码序列中引入点突变;将点突变的prs基因在染色体xyl R位点整合表达,pyr AB基因则在染色体原位被修饰;sdt1基因在染色体sac B位点整合过表达。通过对重组菌摇瓶发酵液中尿苷、胞苷和尿嘧啶的分析,表征相关基因修饰对尿苷合成的影响。【结果】在PRPP合成酶  (本文共12页) 阅读全文>>

华东理工大学
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rCHO细胞流加培养中尿苷对抗体电荷异质性的影响

近年来,基于CHO细胞流加培养生产抗体药物得到了越来越多生产企业的关注。电荷异质性作为抗体药物最为关键的质量属性之一,对药物的生物学活性和安全性等有着多方面的影响。因此,对细胞培养中所产生的抗体电荷变体进行有效的控制非常重要。本研究以表达单克隆抗体的重组rCHO细胞为研究对象,通过析因实验的方法考察了培养过程各参数对抗体电荷异质性的影响,确认了尿苷为影响抗体电荷异质性的关键参数,并初步阐述了其作用机制。首先,采用析因实验考察了尿苷、锰离子和半乳糖对细胞生长、抗体产量及电荷异质性的影响。尿苷的添加能有效地支持细胞的快速生长和高密度的维持,较未添加组整个培养过程的IVCD提高了 50%,抗体终产量提高了 64%。弱阳离子交换色谱检测结果表明,尿苷的添加使酸性变体从30.3%下降为20.1%,而碱性变体从11.8%升高到25.2%。其次,利用正相高效液相色谱、分子排阻色谱和硼酸盐亲和色谱等分析手段,从抗体的糖基化、聚体、糖化和赖氨酸变...  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

天津科技大学
天津科技大学

代谢工程改造大肠杆菌制备尿苷

尿苷作为抗病毒抗肿瘤药物的中间体,具有极其重要的医药价值,已广泛应用于医药行业。微生物发酵法生产尿苷具有条件温和,操作简单,易操作等优点,是工业化生产尿苷的理想方法,高产尿苷的优良菌种构建是发酵法生产的前提条件。本研究采用CRISPR/Cas 9介导的基因编辑技术对野生型大肠杆菌Escherichia coli W3110进行系统的代谢工程改造,构建尿苷高产菌株。首先,将Bacillus subtilis A260的嘧啶核苷操纵子基因整合至E.coli W3110基因组上,构建了菌株UR1。摇瓶发酵结果显示,菌株UR1的发酵液中尿苷的浓度呈现先升高后下降的趋势,然而副产物尿嘧啶在整个发酵周期不断积累;发酵32 h,尿苷产量为3g/L,尿嘧啶产量为4.5g/L。其次,为了减少副产物尿嘧啶的积累,阻断了尿苷的降解,敲除与尿苷分解代谢相关的基因(udp,udk,rihA/B/C),构建菌UR2-5。摇瓶发酵结果显示,尿苷产量为7.8 ...  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

南昌大学
南昌大学

不同饮食状态下补充尿苷对C57BL/6J小鼠糖脂代谢的影响

本实验旨在研究不同饮食状态(基础饮食和高脂饮食)下,补充尿苷对小鼠糖脂代谢的影响。该实验为双因素设计,选择32只7周龄的雌性C57BL/6J小鼠,适应一周后,按体重随机分为4组,每组8个重复,分别为基础饮食(BD),基础饮食中添加0.1%尿苷(BD+UR),高脂饮食(HFD),高脂饮食中添加0.1%尿苷(HFD+UR)。实验进行一个月,眼球采血,并采集肝脏、回肠组织,测定血清和肝脏中糖脂代谢相关指标,并检测组织中与糖脂代谢相关基因及能量代谢相关蛋白的表达。实验结果如下:(1)与基础饮食相比,高脂饮食显著提高小鼠的增重和肝脏指数(P0.05),而在高脂饮食状态下补充尿苷显著降低小鼠的肝脏指数。(2)高脂和尿苷对血清葡萄糖(GLU)和肝脏胆固醇(TC)有交互作用(P0.05),且不同的饮食状态补充尿苷对血清GLU和肝脏TC影响不同。基础饮食状态下补充尿苷显著增加血清GLU和肝脏TC的含量,高脂饮食状态下补充尿苷却显著降低血清GLU和...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

《发光学报》2013年03期
发光学报

4-硫-5-碘尿苷的合成及其与人血清白蛋白间的相互作用

基于硫碱基(thio-base)的易烷基化、易氧化、强紫外长波(UVA)吸收等独特的性质,以及核苷类化合物的抗肿瘤活性,设计合成了一种新化合物4-硫-5-碘尿苷,通过NMR、IR、UV、MS对其结构进行了表征。在模拟生理条件下,利用荧光光谱法、紫外-可见吸收光谱法以及圆二色谱法研究了4-硫...  (本文共8页) 阅读全文>>

《科技信息(学术研究)》2008年10期
科技信息(学术研究)

2,2’-脱水尿苷的酰化和酰卤化反应

通过一种简便有效的合成方法对核苷进行修饰,制备了重要的中间体5’-氧-乙酰基-2,2’-脱水尿苷和3’,5’-二-...  (本文共3页) 阅读全文>>