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表达狂犬病病毒糖蛋白的重组犬2型腺病毒的构建

本试验以犬2型腺病毒全基因组重组质粒pPolyⅡCAV 2及其E3 区重组质粒pVAX E3 为基础,通过DraⅢ和SspⅠ双酶切,缺失第25097bp 26141bp共1044bp的E3区片段,按与编码链相同转录方向插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9 株糖蛋白基因、SV40 polyA基因构  (本文共4页) 阅读全文>>

吉林农业大学
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重组犬2型腺病毒及其免疫研究

狂犬病(Rabies)近年来在我国呈快速上升势头,据卫生部公布的数据表明,2001年全国狂犬病死亡人数891例;2002年全国狂犬病死亡人数1122例;2003年全国狂犬病死亡人数2037例;2004年全国狂犬病死亡人数2651例;狂犬病正严重地危害人民的生命健康。人患狂犬病大部分是由带毒犬咬伤引起的。目前我国用于犬狂犬病预防的疫苗主要是浓缩的灭活苗和弱毒活疫苗,前者由于制备成本昂贵,主要在发达城市推广使用;后者虽然相对便宜,但存在毒力返祖的潜在危险;因此研制安全、有效、廉价的犬用狂犬病疫苗具有重要的实际意义。狂犬病病毒是狂犬病的病原体,属弹状病毒科、狂犬病病毒属,是单股负链RNA病毒,其基因组分别编码N、NS、M、G、L五种蛋白,其中糖蛋白(N)是狂犬病病毒中唯一能刺激机体产生中和抗体的成分,且抗原表位都集中在膜外区部分。活载体疫苗具有成本低、效果好和使用安全、方便等诸多优点。犬2型腺病毒(Canine Adenovirus ...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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狂犬病病毒保护性抗原重组犬2型腺病毒活载体疫苗的构建及其在犬科动物的免疫研究

本研究在前期获得狂犬病病毒糖蛋白重组犬2 型腺病毒的基础上,以狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)SRV9株的核蛋白基因为目的基因,构建了狂犬病病毒核蛋白重组犬2 型腺病毒,并与狂犬病病毒糖蛋白重组犬2 型腺病毒共同进行了犬科动物的免疫试验。首先对犬2 型腺病毒全基因组的E3 区进行了部分缺失,插入了由CMV 启动子、狂犬病病毒核蛋白基因、牛生长激素的ployA 组成的表达盒,构建了含有狂犬病病毒核蛋白基因的重组犬2 型腺病毒基因组,将构建的重组全基因组脂质体介导转染MDCK 细胞,获得了携带狂犬病病毒核蛋白基因的重组病毒。对获得的重组病毒和狂犬病病毒糖蛋白重组犬2 型腺病毒进行病毒形态学观察,反应原性、遗传稳定性分析,以及病毒其他生物学特性的研究。结果显示该两株重组病毒具有典型的腺病毒粒子形态、良好的安全性和反应原性,能够与抗狂犬病病毒的多抗血清反应,进一步的免疫实验研究表明,该重组病毒在犬、狐狸和貂等野生动物体内均能...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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犬2型腺病毒E3区表达调控及狂犬病病毒CVS株糖蛋白重组疫苗研究

为了研制安全、有效、经济的动物用狂犬病疫苗。本研究以犬2型腺病毒(CAV-2)为载体,构建了狂犬病强毒株糖蛋白重组疫苗,进行犬的免疫研究。首先在前期获得的CAV-2载体基础上,对其E3区进行改造,构建了改进的CAV-2载体。然后对E3区进行了三种不同程度缺失,分别插入狂犬病病毒8202株、CVS株、SRV9株不同糖蛋白基因的表达盒,感染性全基因组转染犬肾细胞系获得三株重组病毒CAV-2-8G、CAV-2-CVSG及CAV-2-SRG(本实验室前期获得)。通过鉴定探讨CAV-2 E3区的表达调控,结果显示,这三株重组病毒的形态学特性,反应原性、病毒增殖性、遗传稳定性与母源病毒没有差异。E3区缺失程度不影响外源蛋白表达量。对表达狂犬病CVS株糖蛋白的重组病毒CAV-2-CVSG,通过口服途径进行犬的免疫试验。结果显示,该病毒可以使受试动物产生具有保护水平的中和抗体(0.5个国际单位以上),但是中和抗体水平与前期构建的重组病毒CAV-...  (本文共104页) 本文目录 | 阅读全文>>

《微生物学报》2007年02期
微生物学报

表达狂犬病毒糖蛋白抗原的重组犬2型腺病毒的构建及鉴定

为研制一种预防犬科动物狂犬病的新型疫苗,将含有狂犬病毒ERA株糖蛋白基因(Rabies glycoprotein,Rgp)表达盒的穿梭质粒pVAXΔE3Rgp中的Rgp表达盒克隆入犬2型腺病毒(Canine adenovirus type2,CAV2)骨架质粒pPoly2-CAV2中,获得重组质粒pPoly2-CAV2-ΔE3-Rgp,释放其基因组,转染MDCK细胞系,获得E3缺失区(Deletion o...  (本文共5页) 阅读全文>>

甘肃农业大学
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含狂犬病病毒SRV9株G基因的重组犬2型腺病毒的构建

狂犬病(rabies)是由狂犬病毒(rabies virus)感染引起的一种自然疫源性人兽共患传染病。该病全世界广泛分布,一旦发生无法医治,且由于传染源广泛存在,控制和消灭该病难度很大。目前,进行疫苗接种是预防和控制狂犬病的有效途径。采用基因工程技术进行基因重组活疫苗的研究,是当前狂犬病免疫研究的热点。以病毒为载体的重组活载体疫苗能够很好地表达外源基因,其表达产物能诱导机体产生高水平的细胞免疫和体液免疫。犬二型腺病毒是较为理想的病毒载体,其E3区为复制非必需区,E3区缺失或E3区插入外源DNA病毒仍能复制,因此E3区是构建复制型犬二型腺病毒载体的理想位点。插入E3区外源DNA大小与E3区缺失大小是能否获得重组病毒的关键因素。在前期成功克隆犬2型腺病毒(CAV-2)感染性全基因组的基础上,对犬2型腺病毒(CAV-2)感染性全基因组进行了改造,用EcoRI、Xbal、AscI和XbaI对CAV2全基因组质粒pPoly Ⅱ-CAV-2...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>