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单抗捕获ELISA检测PRRSV抗体的方法的建立

以国内刚刚研制出的PRRSV单克隆抗体为基础,建立了检测PPRS病病毒抗体的单克隆抗体捕获抗原的ELISA法。其单抗包被  (本文共3页) 阅读全文>>

华中农业大学
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猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体捕获ELISA检测方法的建立与应用

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)主要引起妊娠母猪的繁殖障碍和各年龄段猪群的呼吸系统疾病,尤其是哺乳仔猪。该病自20世纪80年代发生以来,已成为危害世界养猪业最重要的传染性疾病之一。我国于1995年首次爆发PRRS,并于次年分离到病原,证实我国存在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)。酶联免疫吸附实验(ELISA)具有操作简便,易于标准化,便于推广等优点。本研究利用抗GST融合蛋白单克隆抗体,建立抗体捕获ELISA方法用于PRRSV阴性、阳性血清检测。利用单克隆抗体特异性高的优点,有望建立高特异性、敏感性和可重复性的抗体检测方法,且建立的ELISA检测方法可借鉴用于其他病原血清样品的检测,且建立的ELISA检测方法可借鉴用于其他病原血清...  (本文共50页) 本文目录 | 阅读全文>>

河南农业大学
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稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

本试验用纯化的猪瘟病毒(CSFV)加入等体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂,分别制成完全佐剂抗原和不完全佐剂抗原,免疫8周龄BALB/c小鼠。五免过后,腹腔超强免疫一次,取小鼠的脾细胞和Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合。经自行建立的间接ELISA方法筛选和3次亚克隆,最终获得了5株稳定分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株,依次命名为C7、C9、G9、G10、4E8。经鉴定,5株抗猪瘟病毒单抗杂交瘤细胞培养上清ELISA效价为1:1600~1:3200,小鼠腹水单抗ELISA效价为1:51200~1:102400。稳定性试验表明,经过连续传代30代和三次冻存复苏后,部分杂交瘤细胞抗体分泌能力有轻微下降,但分泌能力并没有消失,但仍能稳定分泌特异性抗体。对筛选的阳性克隆进行特异性鉴定。交叉反应性试验结果表明,制备的抗猪瘟病毒单克隆抗体C7、C9、G9、G10及4E8与CSFV均呈阳性反应,而与FMDV、PRV、PRRSV、PCV2、P...  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

河南农业大学
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稳定分泌抗猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

本研究将镍离子金属螯合亲和层析法纯化的猪细小病毒VP2蛋白加入等体积的弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂,分别制成完全佐剂抗原和不完全佐剂抗原,免疫6-8周龄BALB/c雌鼠,五免过后,ELISA效价达到1:51200以上的小鼠腹腔超强免疫一次,三天后取小鼠的脾细胞与SP2/0'胃骨髓瘤细胞进行细胞融合。用蔗糖包埋、差速离心法制备的猪细小病毒全病毒作为包被抗原建立间接ELISA方法进行筛选,筛选抗猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株。采用有限稀释法,经过5-6次克隆,最终获得4株稳定分泌抗猪细小病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为:2C5、4B5、1A11、5C6。经测定4B5和2C5仅与全病毒发生反应,1A11和5C6为针对VP2蛋白的单克隆抗体,亚类鉴定结果显示,4B5是IgGl亚类,2C5是IgM亚类。对杂交瘤细胞进行染色体分析,试验结果所得平均染色体数目在92~108之间,符合SP2/0细胞的染色体数目与正常小鼠脾细胞的染色体数...  (本文共72页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
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猪圆环病毒2型单克隆抗体研制与夹心ELISA抗原检测方法的建立

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起世界养猪国家经济损失的重要病原之一。PCV2感染与临床多种综合征疾病有关,这些疾病被统称为猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)或猪圆环病毒病(PCVD)。 PCV2是一个无囊膜单股环状DNA病毒,PCV2基因组上有4个开放性阅读框ORF1~4,其中ORF1~3编码病毒非结构蛋白,ORF2编码病毒结构蛋白,即Cap蛋白。Cap蛋白是病毒的主要免疫原性蛋白,在抗病毒感染免疫中发挥着重要作用。本研究以纯化的PCV2病毒粒子为免疫原,成功筛选出针对PCV2Cap蛋白单克隆抗体,并利用其中的一株单抗和制备的兔多抗血清建立了检测PCV2的夹心ELISA抗原检测方法,为PCV2诊断和病毒蛋白功能研究提供了重要工具。本研究的具体内容如下:1.PCV2单克隆抗体的制备与鉴定本研究利用纯化的猪圆环病毒2型(PCV2)免疫Balb/c小鼠,通过单克隆抗体技术,筛选获得3株能稳定分泌抗PCV2Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,分...  (本文共87页) 本文目录 | 阅读全文>>

《第四军医大学学报》2000年03期
第四军医大学学报

表皮生长因子受体单克隆抗体抗肺癌作用的研究

为观察表皮生长因子受体单克隆抗体 (EGFR Mc Ab) egf/ r3对肺癌的治疗作用 ,采用 MTT法进行体外细胞增殖抑制实验...  (本文共1页) 阅读全文>>

《放射免疫学杂志》2000年02期
放射免疫学杂志

人瘦素单克隆抗体的鉴定

瘦素是肥胖基因(ob)编码的一个45Kb的mRNA在脂肪组织表达的蛋白质 ,含有167个氨基酸 ,分子量为...  (本文共2页) 阅读全文>>