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PCR法筛选检测转基因食品

目的 通过PCR检测花椰菜花叶病毒 (camv) 35S启动子和胭脂碱合酶 (nos)终止子建立筛选食品中有无转基因成分的方法。方法 用改良溴化十六烷三甲基铵 (CTAB)法制备转基因抗除草剂〔大豆RoundUpReadyTMSoybean(RRS)〕和转基因抗虫玉米系列标准品Bt176Maxim  (本文共3页) 阅读全文>>

石河子大学
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酿酒酵母终止子的人工设计及在途径优化中的应用

RNA聚合酶II转录的终止代表转录循环的最后一步。真核生物终止子通过影响mRNA的稳定性、转录效率和位置对转录和翻译过程起到重要的调控作用。本论文依据酿酒酵母终止子关键核心区的序列和结构特点,按照可调节、可控制等原则设计人工终止子,对酿酒酵母人工终止子进行克隆和表征,以番茄红素生物合成途径在酿酒酵母中的精细调控为验证对象,研究人工终止子对代谢途径的调控规律和对合成途径代谢流的调节效率。主要结果如下:(1)将合成的含有不同linker 1序列的人工终止子与含有中等强度的启动子TYS1p和绿色荧光蛋白基因eGFP的验证载体连接,筛选得到了266个人工酿酒酵母终止子,建立了人工终止子文库。以eGFP基因的荧光蛋白表达强度(FI)作为人工终止子强度的表征指标,酵母人工终止子的强度范围为2.3648~3.5270,平均荧光强度值为3.0719。(2)通过对人工终止子测序及对终止子linker 1序列分析发现,人工终止子的强度随着终止子的l...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

电子科技大学
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基于序列的细菌终止子识别

转录终止是基因表达的重要调节步骤,而转录的结束由终止子决定。如果基因中没有终止子,则转录不能停止,从而导致基因表达异常。检测细菌中的终止子不仅可以确定细菌生物中的操纵子结构,还可以改善基因组的注释。因此,准确识别转录终止子对于转录调控的研究来说是非常重要的。虽然生物化学实验方法可以清楚准确地识别终止子序列,但是非常耗时且昂贵。为提高效率,人们已提出一些计算方法。这些方法主要分为两类:(1)使用核酸组成信息来描述终止子。(2)将发夹结构特征以及下游的T富含区域作为特征用于描述终止子。由于这些方法不能反映终止子的统计特征,所以本文提出了基于序列信息,用机器学习的方法来识别细菌终止子。本文基于低冗余性基准数据集构建了用于识别细菌转录终止子的“iTerm-PseKNC”模型和“DeepTerm”模型。(1)“iTerm-PseKNC”是基于支持向量机(SVM)开发的终止子预测模型,该模型使用二项分布特征筛选技术得到伪K-元组核苷酸组成(...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京化工大学
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T7转录筛选器的构建及应用

转录系统是表达蛋白的重要组件,其转录强弱直接影响到启动子下游基因的表达强弱。衡量转录系统强弱的基本方法是通过在启动子下游引入报告基因,测定报告基因的表达强弱进而判断转录系统的强弱。但是影响外源蛋白表达强弱的因素较多,此外,像T7转录系统由于其转录能力超强,转录过程有时候会明显影响宿主正常的生长和代谢,因此会发生突变,降低或者丧失其转录能力。基于以上问题,通过终止子的转录通读现象构建了转录强度筛选器,在基因终止子下游插入一段筛选压力基因(“RBS—抗性基因”的结构),与终止子上游的基因构成一种多顺反子结构。转录能力强,通读概率大,抗性基因转录量就大,抗性能力就强,转录能力与抗性基因的表达量呈正相关。通过抗性强弱的检测,判断和筛选出不同转录能力的转录系统。采用改变抗生素浓度的方法,检测、筛选到转录强度不同的T7转录系统,并通过工艺控制获得自适应、稳定的T7转录系统。因此,本论文的结果包括以下四点:(1)T7转录筛选器的构建。本实验需...  (本文共123页) 本文目录 | 阅读全文>>

石河子大学
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酿酒酵母终止子的表征及在番茄红素合成途径中的应用

终止子作为RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列,负责基因表达的“输出”。真核生物终止子通过影响mRNA的稳定性、转录效率和位置对转录过程起到重要的调控作用。本论文通过对酿酒酵母基因组序列分析,对自然酿酒酵母终止子进行克隆和表征,同时以番茄红素生物合成途径为验证对象,探讨终止子在基因表达和途径精细调控中的应用潜力,主要结果如下:(1)从酿酒酵母糖酵解途径和TCA循环途径中克隆得到了100个酿酒酵母终止子,并与含有启动子TYS1p和绿色荧光蛋白基因eGFP的验证载体连接,建立了终止子文库。以eGFP基因的荧光蛋白表达强度(FI)作为终止子强度的表征指标,以终止子PGK1t为标准,在文库里发现了45个强终止子,31个中强度终止子和24个弱终止子,酵母终止子的强度范围为0.0613~1.8002,平均相对荧光强度值为0.9945。(2)通过突变酵母终止子的控制元件(效率元件、位置元件和Ploy(A)),发现效率元件是控制终止子强度的重要...  (本文共81页) 本文目录 | 阅读全文>>

《常熟高专学报》1999年04期
常熟高专学报

T_(32)终止子在棒状杆菌基因表达中的功能

分别构建成两个克隆了邻苯二酚双加氧酶基因(xylE)的棒状杆菌—大肠杆菌穿梭表达质粒pJL13和pJL23...  (本文共3;页) 阅读全文>>