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小鼠谷胺酸脱羧酶65基因克隆的初步报告

目的克隆小鼠谷胺酸脱羧酶65(GAD65)基因。方法(1)用RT-PCR的方法扩增小鼠GAD65基因。(2)将GAD65克隆到T载体PUCm-T上。  (本文共3页) 阅读全文>>

江南大学
江南大学

L-天冬氨酸α-脱羧酶催化失活相关分子机制的研究

氨基酸脱羧酶(Amino acid decarboxylase)是一类催化氨基酸脱去羧基生成小分子氨基酸或者生物胺的裂解酶的总称,其产物在生物体内大多具有特殊的生理作用。其中L-天冬氨酸α-脱羧酶(L-aspartate alpha-decarboxylase,EC:4.1.1.11,PanD/ADC)因其能够催化L-天冬氨酸脱去α-羧基生成β-丙氨酸而成为最受关注的氨基酸脱羧酶之一。β-丙氨酸作为重要的平台化合物,是合成泛酸钙、肌肽、1,4-丁二胺、丙烯酰胺等大宗化学品的前体,在生物制药、食品、化工等领域均有广泛的应用,具有巨大的工业价值。当前利用L-天冬氨酸α-脱羧酶和廉价原料L-天冬氨酸绿色制造β-丙氨酸已逐步成为取代传统化学法的主流工艺。然而,已实现工业化应用的L-天冬氨酸α-脱羧酶仅来源于大肠杆菌、谷氨酸棒杆菌或枯草芽孢杆菌,生产效率极为低下,因为它们在催化过程中均表现出不可逆的失活现象(简称催化失活),而目前该不可逆...  (本文共102页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京理工大学
北京理工大学

酚酸脱羧酶参与成团泛菌YS19中的吲哚信号调控通路

为更好地适应周围环境,细菌进化出多种信号调控机制,其中,吲哚介导的信号调控是近年来备受关注的一种。吲哚信号能调控细菌的诸多生理行为,例如细菌聚集、运动性、抗逆性,乃至细菌在宿主的定殖等,其调控机制是目前细菌学的研究热点之一。获得吲哚调控通路中的关键蛋白,并以此展开对吲哚信号调控网络的研究对认识其调控机制具有重要意义。本研究选择能形成独特共质体聚集结构的水稻内生优势成团泛菌YS19作为研究对象,利用mTn5转座子插入突变技术构建突变文库,通过报告基因gusA检测筛选到一株受吲哚信号负调控的阳性突变子,报告基因的表达被下调34.3%。利用热不对称交错PCR技术鉴定其突变位点为酚酸脱羧酶基因padC,其序列全长525 bp,系统发育树分析显示其在种内较为保守。利用RT-PCR技术检测发现,吲哚信号显著抑制了该基因的表达。研究发现,当编码该酚酸脱羧酶的基因padC突变后,YS19的诸多生理行为受到影响。在LB培养基中,padC的突变未影...  (本文共59页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京化工大学
北京化工大学

两种不同来源的二羟基苯甲酸脱羧酶的结构生物学研究

随着工业发展的进程,煤与石油等非再生能源的不断消耗,废气中的二氧化碳造成的环境影响也越来越大,其处理方法受到各国的关注。在生物科学的迅速发展中,有研究发现某些生物具有固定二氧化碳的生化反应,探究如何在温和的条件下对二氧化碳进行生物固定则成为了研究热点。常温下,不需要添加任何辅助因子以及ATP,芳香羧酸脱羧酶(主要催化苯酚类衍生物)就能够转化芳香类羧酸成为芳香烃与二氧化碳,同时这个反应也是可逆的。为了推进生物法在固定二氧化碳中的应用,本文针对两种不同来源的苯甲酸脱羧酶进行了结构生物学研究。本文工作根据前人从数据库挖掘基因所获得的芳香羧酸脱羧酶基因,设计引物,成功构建克隆pET-22b-AoDHBD(Aspergillus oryzae米曲霉菌,二羟基苯甲酸脱羧酶)与pET-22b-TmSAD(Trichosporon moniliiforme毛孢子菌属,水杨酸脱羧酶),导入Rosetta(DE3)大肠杆菌中进行表达纯化,并获取大量...  (本文共96页) 本文目录 | 阅读全文>>

广西大学
广西大学

亚热带红树林土壤沉积物中产L-天冬氨酸α-脱羧酶的菌株Providencia sp.GZ1的鉴定及酶学特性研究

L-天冬氨酸α-脱羧酶(L-aspartateα-decarboxylase,PanDEC4.1.1.11)是微生物泛酸(由泛解酸和β-丙氨酸组成)生物合成途径中的关键酶,由panD基因编码,以丙酮酰基为催化活性中心,具有严格的底物特异性,可以催化L-天冬氨酸脱去α竣基生成β-丙氨酸。β-丙氨酸的合成途径只存在于微生物和植物细胞中,因此以L-天冬氨酸α-脱羧酶为靶点设计的抗真菌、抗细菌药物和除草剂对动物或人类无害。β-丙氨酸可用于合成肌肽、泛酸钙、巴柳氮及帕米磷酸钠等医药产品,用途非常广泛。目前国内β-丙氨酸主要采用化学合成法,存在成本高、生产条件对环境不友好等缺点,开发绿色安全的生物法生产工艺将具有十分明显的经济和社会效益。但目前筛选到的产酶菌株产酶量较低、酶活性低,难以规模化生产和广泛应用。本研究通过传统纯培养技术,从亚热带海洋土壤沉积物样品中初步分离筛选到八十株具有L-天冬氨酸α-脱羧酶活性的菌株,经纸层析复筛后选择其中4...  (本文共117页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
华中农业大学

核盘菌草酸脱羧酶基因抗菌核病潜能研究

由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary)引起的菌核病(White mold)是造成农作物减产,特别是油料作物减产的一种重要病害。菌核病对世界上大豆,油菜,向日葵等油料作物的生产造成了巨大损失。一些植物中虽然存在针对核盘菌的数量抗性性状,但是到目前为止还没有发现完全基因抗性性状的存在,这给培育抗病新品种带来了巨大困难。近几年随着转基因技术的发展,人们期望使用转基因技术来增强核盘菌寄主对核盘菌的抗性,寻找可以利用的基因资源迫在眉睫。鉴于草酸在核盘菌致病中的重要作用,本研究以模式生物拟南芥和世界上最重要的油料作物油菜和大豆为基础,通过农杆菌介导的植物转化的方法,分别采用组成型表达和病毒介导表达的方式来评价一个来自病原菌自身的草酸脱羧酶基因的抗病潜力,并对其效果与现在人们最熟知的草酸氧化酶做了横向比较。试验表明当拟南芥表达草酸脱羧酶时,有一半以上的植株表现出对菌核病的抗性。同时在病毒介导...  (本文共49页) 本文目录 | 阅读全文>>