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pcDNA3.1(+)-mIL-12在Lewis细胞中生物活性的探讨

目的:建立稳定表达小鼠IL-12(mIL-12)的小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞系LLC/mIL-12,为进一步研究mIL-12的免疫调节机制及其抗肿瘤作用奠定基础。方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-mIL-12,脂质体转染LLC细胞并测其表达,流式细胞  (本文共4页) 阅读全文>>

山东农业大学
山东农业大学

稳定表达CD163的猪肺泡巨噬细胞系建立及其特性研究

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)在世界范围内普遍流行,它是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS Virus,PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍、断奶仔猪呼吸道症状、生长迟缓以及高死亡率为特征的一种急性、高度传染的病毒性疾病。由PRRSV诱导细胞因子分泌的体外研究需要猪肺泡巨噬细胞(PAM)和与免疫细胞的相互作用。然而,已有的永生化PAM细胞不允许PRRSV感染。从猪原代PAM(pPAM)分离的猪CD163受体可赋予PRRSV对非易感细胞的感染性,从而建立新的细胞系以更方便地研究PRRSV感染动力学及其诱导相关细胞因子分泌的分子机制。本研究以pPAM扩增CD163基因,利用慢病毒表达系统将其插入到永生化PAM细胞的染色体中,使其随细胞增殖而稳定表达。试验鉴定显示,用高致病性(Highly Pathogenic)HP-PRRSV毒株JXA1感染mP...  (本文共82页) 本文目录 | 阅读全文>>

湖北工业大学
湖北工业大学

人博卡病毒非结构蛋白NS1稳定表达细胞系的建立及其反式激活功能初步研究

人博卡病毒1型(Human bocavirus 1,HBo V1)是细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属的成员之一。HBo V1的感染部位是人体呼吸道,会引起严重的呼吸道疾病,最常见的症状是急性哮喘,在6个月到2岁的婴幼儿当中感染率较高,对人类健康具有极大危害。NS1是HBo V1的主要非结构蛋白,可以通过可变剪接和多聚腺苷酸加尾的机制形成编码大小约100k Da的NS1蛋白(NS1-100),而未经过可变剪接的编码大小约70k Da的NS1蛋白(NS1-70)。NS1作为细小病毒科的多功能蛋白,在细小病毒的复制、转录激活、引发细胞凋亡和细胞病变效应等方面发挥着重要作用。反式激活作用作为NS1蛋白的最主要功能之一,可以显著提高病毒基因组转录水平,加速病毒在细胞内的增殖。HBo V1的NS1蛋白反式激活功能研究,对于进一步深入探讨HBo V1的NS1在病毒复制过程的作用机制具有重要意义。本研究以HBo V1 WHL-1(NCBI登录号...  (本文共69页) 本文目录 | 阅读全文>>

《畜牧兽医学报》2018年06期
畜牧兽医学报

干扰和稳定表达GP5对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染早期复制的影响

为探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)主要结构蛋白GP5对病毒复制的影响及其机制,利用PiggyBac Transposon载体系统构建表达GP5的重组质粒(pPB-GP5),转染Marc-145细胞通过嘌呤霉素抗性筛选和3次亚克隆,获得稳定表达GP5的Marc-145细胞,在确定GP5表达不影响细胞增殖的基础上,用PRRSV感染筛选的细胞,通过N基因拷贝数、N蛋白表达水平和病毒滴度检测确定GP5表达对病...  (本文共10页) 阅读全文>>

《实用癌症杂志》2019年07期
实用癌症杂志

稳定表达人源GRM4基因的乳腺癌细胞株的筛选及鉴定

目的构建重组人源GRM4基因慢病毒载体,筛选稳定表达GRM4蛋白的乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法 PCR扩增GRM4基因片段,扩增产物连接到带有绿色荧光蛋白GFP的慢病毒载体表达质粒中,构建重组荧光慢病毒质粒GFP-GRM4,同时以慢病毒空载体作为阴性对照组;将GFP-GRM4与包装质粒p MD2. G、ps PAX2共转染293T包装细胞中,24 h后观察荧光表达情况及被感染细胞的形态; 48 h后收集病毒上清液,以病毒上清液感染乳腺...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国细胞生物学学报》2018年10期
中国细胞生物学学报

可稳定表达ZsGreen1基因的正常细胞来源单核细胞株的构建

为探索构建可表达外源基因的正常细胞来源单核细胞株的可行方案,该研究分别尝试以脂质体转染法、腺病毒载体感染法和含Tet-On调控元件的慢病毒载体感染法,构建可表达绿色荧光蛋白的SC细胞株。经慢病毒感染和靶向扩增获得稳定表达目的基因的SC细胞后,该研究进而验证了该细胞可否在PMA诱导下分化为典型的巨噬细胞。研究结...  (本文共9页) 阅读全文>>