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恩诺沙星单克隆抗体的制备及鉴定

碳二亚胺法合成了2种恩诺沙星(enrofloxacin,ENFX)人工抗原ENFX-BSA和ENFX-OVA,用紫外扫描和分析载体蛋白的氨基酸组成等方法对人工抗原进行鉴定,ENFX与BSA的结合比约为48∶1。用ENFX-BSA免疫BALB/C小鼠,采用显微克隆技术最终筛选出2株特异性分泌细胞2C5和5D5并获取腹水,纯化后腹水效价分别为1∶32  (本文共5页) 阅读全文>>

《江西农业大学学报》2013年05期
江西农业大学学报

抗恩诺沙星单克隆抗体的制备与鉴定

制备抗恩诺沙星的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。采用活化酯法合成恩诺沙星-牛血清白蛋白作为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤细胞技术建立杂交瘤细胞株,利用体内诱生法制备单克隆抗体,然后对制备的单抗的效价、敏感性、特异性、亲和力和亚型等免...  (本文共4页) 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

恩诺沙星单克隆抗体的制备、鉴定及免疫学检测方法的建立

恩诺沙星(Enrofloxacin,Enro)是一种常用的氟喹诺酮类(Fluoroquinolone )抗生素,监测与普查Enro 的超标使用,必须要有高效、灵敏、特异的检测方法。本研究利用N-羟基琥珀酰亚胺法制备出Enro 完全抗原,用杂交瘤技术制备出抗Enro 单克隆抗体,初步建立了检测Enro 残留的ELISA 方法。首先以牛血清白蛋白(BSA)为载体蛋白,与Enro 偶联合成免疫抗原Enro-BSA;同样的方法,以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白,使之与Enro 偶联合成检测抗原Enro-OVA,并且进行紫外扫描光谱、动物实验及偶联比计算等方面的鉴定。将制备好的免疫抗原Enro-BSA 免疫小鼠,取脾进行融合,共筛选出两株抗恩诺沙星单克隆抗体3A8、5D7。取成年Balb/c 雌性小鼠,将处在对数生长期的杂交瘤细胞注射小鼠腹腔内,制备腹水,-20℃保存备用。用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水,经SDS-PAGE 电泳,可以看到纯...  (本文共79页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国兽药杂志》2006年10期
中国兽药杂志

恩诺沙星单克隆抗体的制备及其鉴定

采用碳二亚胺法和氯甲酸异丁酯法合成恩诺沙星的人工抗原,结合比为15∶1。用人工抗原腹腔免疫BALB/c小鼠,有限稀释法筛选获得分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株2H10C2F11,...  (本文共4页) 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

大鼠髂骨肌淋巴结法和小鼠脾脏法制备抗恩诺沙星单克隆抗体的比较研究

本实验将恩诺沙星与牛血清白蛋白用EDC法进行偶联,成功地制备了免疫抗原,分别免疫Wister大鼠和BALB/C小鼠;利用恩诺沙星与鸡卵清蛋白偶联制备的包被抗原采用间接ELISA的方法筛选阳性鼠和阳性杂交瘤细胞;采用杂交瘤细胞建株技术,共获得四株分泌抗恩诺沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株。利用常规的小鼠脾细胞法建立了M1B3和M4E6两个杂交瘤细胞株,利用大鼠髂骨肌淋巴结法建立了R2B1、R4D3两个杂交瘤细胞株。利用M1B3和R2B1及制备的单克隆抗体进行了杂交瘤细胞株的染色体众数、遗传稳定性;单克隆抗体的效价、分子量、亚类、有效浓度、纯度、蛋白质含量、亲和力、特异性十个方面的对比研究。通过两种不同的制备抗恩诺沙星单克隆抗体的方法的比较,验证了利用大鼠髂骨肌淋巴结法制备快速单克隆抗体的可行性。  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>

西南农业大学
西南农业大学

抗恩诺沙星单克隆抗体的研制及初步应用

恩诺沙星(enrofloxacin, ENR)是动物专用的氟喹诺酮类药物,广泛用于动物疾病的治疗和预防。近年来其在动物组织中的残留危害,引起广泛关注。美国等国家已经禁止恩诺沙星用于动物生产,欧盟规定在可食性动物组织中恩诺沙星的最高残留限量(MRL)为30ug/kg。本研究旨在通过试验,制备抗ENR单克隆抗体,建立ENR残留的免疫学检测方法,为试剂盒的开发应用奠定基础,试验结果如下:1.采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法合成了两种人工抗原ENR-BSA、ENR-OVA,用Feel_3显色、紫外扫描对人工抗原进行确认。结果表明:透析外液与Fecl_3显浅黄色,透析内液与Fecl_3呈红色且略显混浊,说明透析内液仍存在高浓度的恩诺沙星,初步确认ENR与BSA、OVA的交联成功;紫外扫描图谱显示ENR-BSA和ENR-OVA分别在319nm和320nm波长处有最大吸收峰,此外还分别在332nm波长处有ENR特征峰,进一步说明半抗原ENR已分...  (本文共59页) 本文目录 | 阅读全文>>