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NDV长春株和四平株HN/F核酸疫苗的构建及表达

将新城疫病毒 (NDV)长春株和四平株 HN插入 p IRES1多克隆位点 (Eco R )中 ,构建成核酸表达疫苗 p IRc HN和 p IRs HN,然后切除 p IRc HN和 p IRs HN的新霉素基因 ,将长春株和四平株 F基因分别插入其中 ,构建成 p IRc HNF和   (本文共3页) 阅读全文>>

《天津医科大学学报》2010年03期
天津医科大学学报

仙台病毒Tianjin株及其HN/F基因真核表达质粒对人副流感病毒Ⅰ型的血清中和实验研究

目的:探讨仙台病毒Tianjin株(SeV)及其核酸制备预防人副流感病毒I型(hPIV-1)疫苗的可行性。方法(:1)用SeV免疫小鼠3次后取血清,间接ELISA法检测免疫血清抗体效价。(2)将倍比稀释的免疫血清与100 TCID50/0.1 ml的hPIV-1进行中和实验,观察细胞病变(CPE)并计算50%血清中...  (本文共4页) 阅读全文>>

中国人民解放军军需大学
中国人民解放军军需大学

新城疫病毒四平株、长春株及其HN/F蛋白对HeLa细胞的作用

本实验选用在真核细胞中能稳定高效表达的pIRESlneo载体,用XbaⅠ、BamHⅠ消化含NDV长春弱毒株HN蛋白基因(HN_c)的pKSHN_c质粒和含NDV四平强毒株HN蛋白基因(HN_s)的pKSHN_s质粒,获得HN_c和HN_s基因,然后分别插入真核表达质粒pIRESlneo多克隆位点,置于CMV启动子下游,构建成pIRHN_c和pIRHN_s。将pIRHN_c质粒的新霉素(neo)基因切除,置换成NDV长春弱毒株F蛋白基因F_c,构建成pIRHNF_c。经酶切鉴定插入正确后,用脂质体法转染HeLa细胞,并于转染后24h、48h、72h和96h收获细胞,同时用G418进行筛选,待筛选细胞长成单层后收获一次细胞。经血凝实验、SDS-PAGE、Westernblot分析和间接免疫荧光实验表明:HN蛋白基因在HeLa细胞中获得高效表达,且G418筛选后表达量高于筛选前的表达量。表达产物主要位于细胞膜,且具有血凝素活性和抗原性...  (本文共60页) 本文目录 | 阅读全文>>