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不同启动子对重组痘苗病毒表达狂犬病病毒糖蛋白基因的影响

以血凝素(HA)基因为侧翼,将狂犬病病毒糖蛋白基因cDNA置于不同类型的痘苗病毒复合启动子下游,构建了4种表达质粒。重组表达质粒转染已感染WR株痘苗病毒的BHK21细胞,并通过鸡红细胞吸附试验,筛选、纯化出与表达质粒对应的4组HA-重组痘苗病毒:vSFJ1-10RVgp,vSFJ2-16RVgp,v  (本文共5页) 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

纤突蛋白高变区对传染性支气管炎病毒致病性、嗜性以及血清型影响的研究

传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)可导致禽急性高度接触性疾病,给世界养禽业带来严重的经济损失。IBV为囊膜病毒,属于尼多病毒目(Nidovirale)、冠状病毒科(Coronaviridae)、冠状病毒属(Coronavirus)。其最重要结构蛋白之一是纤突蛋白(Spike protein,S protein),该蛋白具有高变的S1亚基和保守的S2亚基。早期研究者将S1亚基氨基端高度变异区域定义为高变区(hypervariable regions,HVRs)。经鉴定5个中和抗原位点与HVRs共定位,且HVRs与受体结合区域(receptor-binding domain)部分重合,因而HVRs可能在IBV细胞组织嗜性、血清型和抗原性等方面发挥作用,而有必要揭示其生物学功能。本研究选择Beaudette和ck/CH/LDL/091022毒株为研究对象。Beaudette毒株是适应V...  (本文共92页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

表达H9亚型禽流感病毒血凝素的重组火鸡疱疹病毒构建及其安全性与免疫效力试验

H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)对鸡的致病性低,仅引起轻微的呼吸道症状和短时间产蛋下降,但混合感染或继发感染其他病原可导致较高的发病率和死亡率。H9亚型禽流感对养鸡业危害较大,免疫接种是防控该病的主要策略之一。目前生产上常用的H9亚型禽流感疫苗为全病毒灭活疫苗,这类疫苗仅能诱导产生高水平的循环抗体,而不能有效地激发细胞免疫和黏膜免疫应答。近年来,以火鸡疱疹病毒(herpesvirus of turkey,HVT)为载体的重组病毒活疫苗已经成为研究热点。一方面,HVT具有较多的复制非必需区可供外源基因插入;另一方面HVT是常用的家禽疫苗,可供1日龄雏鸡免疫或18日龄胚内注射免疫,能够更早地诱导免疫应答。本研究旨在以HVT为载体,构建能稳定表达H9亚型AIV血凝素(HA)的重组病毒活疫苗候选毒株,与现有灭活疫苗组合使用,以提供更加有效的免疫保护。1.rHVT-YBF003株的构建及其遗传稳定性...  (本文共126页) 本文目录 | 阅读全文>>

华南农业大学
华南农业大学

双表达gC基因的重组伪狂犬病毒gI/gE缺失株的构建及免疫效力评价

伪狂犬病毒(Pseudorabies viurs,PRV)又称猪疱疹病毒1型(Suid herpesvirus1),属疱疹病毒科,α-疱疹病毒亚科,猪是其易感动物,可引起猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)。疫苗免疫是防控该病最为有效的方法,但2011年以来国内许多猪场在使用疫苗后仍然爆发了伪狂犬病疫情。多位学者研究表明,现有PRV疫苗已不能对流行毒株的感染提供完全保护,因此有必要研究针对流行毒株的新疫苗。本研究拟以rPRV-AH-gI~-/gE~-/EGFP~+株为亲本毒,利用同源重组技术在缺失gI、gE基因的部位插入PRV gC基因表达盒,构建双表达gC基因同时缺失gI、gE基因的重组病毒rPRV-AH-gI~-/gE~-/gC~+,在此基础上研究该病毒的生物学特性及免疫原性。主要研究如下:1.重组病毒rPRV-AH-gI~-/gE~-/gC~+的构建以PRV AH-China-2013(简称PRV-AH)gC基因编...  (本文共66页) 本文目录 | 阅读全文>>

内蒙古农业大学
内蒙古农业大学

不同毒力G蛋白狂犬病重组病毒的拯救及生物学特性研究

本课题研究以狂犬病病毒疫苗毒LBNSE株的反向遗传学系统为骨架,分别用RT-PCR扩增CVS-11株(标准攻击毒株)与SAD株(疫苗毒株)的G基因,将该基因分别与pLBNSE质粒中的的G基因进行替换,构建两株重组质粒。利用反向遗传学系统拯救出两株重组不同毒力狂犬病G蛋白的重组病毒rLBNSE-SfG和rLBNSE-CfG,然后对两株病毒的生物学特性进行探究。应用Overlap PCR的方法,利用Snapgene生物学软件设计引物,对实验室保存的全长pLBNSE质粒的Pst I和EcoR I酶切位点进行改造,改造后质粒命名为r-pLBNSE。根据GenBank上发表的SAD株和CVS11株的全基因序列,利用Primer5生物学软件分别设计G基因引物(G基因前加信号肽和flag标签),分别进行RT-PCR扩增出SAD株和CVS11株的G基因序列。将扩增出的G基因序列,经酶切、连接等步骤替换到改造后的r-pLBNSE质粒上,构建出重组...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

塔里木大学
塔里木大学

山羊痘病毒KLP2基因缺失的重组病毒的纯化及ANK基因缺失病毒的构建

山羊痘呈世界性流行,疫苗注射免疫是预防本病较为有效的方法。但是由于使用的是弱毒苗,使用过程中往往产生一些副作用,例如孕羊流产、毒力返强等。为了进一步降低疫苗毒性,本研究对以细胞重组法得到的缺失毒力因子KLP2的重组羊痘病毒疫苗株进行纯化,以获得更加安全的羊痘疫苗。同时为了研究山羊痘的另一毒力因子ANK的作用,构建了缺失该基因病毒的表达载体,为进一步研究更安全有效的羊痘疫苗提供了依据。首先无菌采取2~3月龄的健康小公羊睾丸和健康发育的胎羊,分别分离睾丸组织和胎羊皮肤组织,用剪碎组织和胰酶消化分散细胞法培养并获得生长良好的睾丸和胎羊皮肤原代细胞,并对其培养特性进行研究。细胞贴壁生长至80%~90%时接种山羊痘病毒疫苗株,培养并观察其细胞病变。其次,提取KLP2缺失的转移载体质粒,用Lipofectamine ~TMM 2000转染至山羊痘病毒感染的羊睾丸原代细胞,培养并定期显微镜下观察带绿色荧光的重组病毒。挑取带荧光细胞接种原代细胞...  (本文共53页) 本文目录 | 阅读全文>>