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深海热液区管状蠕虫两个C型凝集素的克隆鉴定与功能研究

C型凝集素(C-type lectin)是一种能够识别并结合糖的蛋白,具有多种生物活性,如介导细胞间的相互作用,参与信号转导,并在病原体识别与先天免疫过程中发挥重要作用等。管状蠕虫(tubeworm)是许多深海热液区的代表性物种之一,目前关于其免疫系统的研究很少。为探索深海热液管状蠕虫天然免疫系统的特征与功能,本论文针对来自马努斯海盆深海热液的管状蠕虫,研究了其C型凝集素的功能与性质。通过“科学号”马努斯热液航次,我们采集到了热液管状蠕虫Alaysia sp.样品,克隆得到了两个C型凝集素基因(Lec1和Lec2)。序列分析表明Lec1和Lec2具有典型的C型凝集素结构域,但两者的序列相似性非常低(30.6%),并且它们与已知的其他C型凝集素序列同源性也非常低(10.8%–20.4%)。为研究Lec1和Lec2的功能,我们在大肠杆菌中表达了这两个凝集素的重组蛋白(rLec1与r Lec2),分析了重组蛋白的凝血能力及对深海和近海  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

沈阳农业大学
沈阳农业大学

柞蚕凝集素基因克隆及表达分析

凝集素作为一种模式识别受体,在昆虫免疫系统中发挥着重要的作用,主要通过识别病原微生物表面的特定模式分子来激活昆虫免疫防御系统。不同的凝集素含有的特异性碳水化合物识别结构域CRD不同,能够识别的病原微生物表面特定模式分子也不同。其中C型凝集素是鳞翅目昆虫中凝集素的主要类型,是一种Ca~(2+)依赖的糖结合蛋白,对病原物表面的糖蛋白、糖脂都有较好的结合能力。本文以柞蚕凝集素为对象,对其序列特征、基因表达水平、重组蛋白的凝集活性进行研究,以期进一步明晰柞蚕免疫中模式识别受体—凝集素的功能及作用机理。1.本研究从柞蚕中肠转录组数据库中筛选出柞蚕凝集素相关序列,设计引物,克隆获得4个柞蚕凝集素基因Lectin、Lectin16、Lectin21、CTL,并对其氨基酸序列进行比对和生物信息学分析:Lectin开放阅读框(ORF)长度为678 bp,编码225个氨基酸,预测其等电点(PI)为6.30,蛋白分子质量(Mw)为26.11 kDa,...  (本文共83页) 本文目录 | 阅读全文>>

《复旦学报(自然科学版)》2001年05期
复旦学报(自然科学版)

禾谷类植物胚凝集素基因的分子起源与进化

对禾谷类植物胚凝集素的基因结构进行了详细分析,发现该基因有4个hevein (结合 域)编码区.研究表明,禾谷类植物胚凝集素基因是由1个较小的带单个heve in的祖先基因(或片段)经过2次顺接重复产生的.第一次重复产生1个双hevein结 构,然...  (本文共5页) 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

凝集素基因克隆及功能分析

目前农业生产中,蚜虫危害十分严重,造成巨大的经济损失。转基因技术的发展为植物抗蚜品种的培育开辟了新的途径。已有研究表明,植物凝集素作为一种非免疫球蛋白,是一种潜在的抗蚜候选蛋白。因此,本研究拟以抗蚜虫的三叶半夏、掌叶半夏及海芋为材料进行凝集素基因的克隆,并导入到模式植物烟草中进行抗蚜能力分析,以期为植物抗蚜基因工程的研究提供新的基因源。主要研究结果如下:1、根据已获得的天南星科凝集素基因保守区序列设计简并引物,利用同源克隆技术以提取的三叶半夏RNA反转录得到的cDNA为模板,通过PCR扩增获得了约400 bp的基因片段,然后通过3’和5’RACE技术克隆得到了该基因的全长cDNA序列,序列分析表明:该基因cDNA全长为1173 bp,开放读码框为810 bp,编码269个氨基酸的前体蛋白;编码蛋白包含3个QDNY结构域,即甘露糖结合位点,推测其可能为凝集素基因;然后与已公布的凝集素进行同源性分析,发现该基因编码蛋白与其他天南星科...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《水产学报》2013年11期
水产学报

秀丽白虾4种C型凝集素基因的克隆、组织表达与进化分析

C型凝集素是一类Ca2+依赖活性的糖蛋白,在虾蟹类的免疫防御中发挥着重要作用。采用RT-PCR及RACE技术首次克隆了秀丽白虾C型凝集素家族4个基因(EmCTL-1、EmCTL-2、EmCTL-3、EmCTL-4)的cDNA全长。这4个C型凝集素基因的cDNA全长分别为1 390、1119、1 364和1 299 bp,分别含996、969、1 026和1 044 bp的开放阅读框,各编码332、322、341和347个氨基酸的蛋白...  (本文共13页) 阅读全文>>

河南科技大学
河南科技大学

荔枝凝集素基因的克隆与表达分析

荔枝是一种热带名优水果,在我国热带农业经济中具有重要地位,但生产上面临病虫害和采后不耐储藏的困扰。凝集素是指含有至少一个催化结构域,并能与特异性单糖或寡糖进行可逆结合的蛋白质,这种糖识别特性使其能够提高植物的抗病虫能力。荔枝凝集素基因的克隆及实时表达研究对促进荔枝生产必将具有一定指导意义。本文以妃子笑、南岛无核荔和紫娘喜为研究对象,首先对荔枝果实采后衰老过程中若干生理变化进行初步研究,同时运用PCR等方法克隆荔枝凝集素基因的编码区序列和启动子调控序列,并对序列进行生物信息学分析,在此基础上应用荧光定量PCR技术对凝集素基因在荔枝中的表达情况进行相对定量。结果如下:1)荔枝果实采后衰老过程中若干生理变化荔枝采后随着果皮褐变程度的加剧,果皮花色素苷含量减少,通透性增大,pH值增高,果实发病率上升。低温和套袋可以降低荔枝果皮水分的散失率,延缓荔枝褐变的进程。2)荔枝凝集素基因的克隆与表达从荔枝中克隆获得了荔枝凝集素基因cDNA和gDN...  (本文共67页) 本文目录 | 阅读全文>>