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OsMKK1和OsMKK6互作蛋白的筛选与鉴定

植物MAPK级联途径广泛参与调控植物的细胞分化、激素应答、胁迫响应和生长发育等过程。OsMKKs是该途径中游的一类促分裂原蛋白激酶激酶,在信号转导过程中通过汇聚上游刺激信号并将其传递给下游靶蛋白,从而使植物适应外界逆境。研究表明,OsMKKs蛋白家族分为A、B、C和D四个亚族,其中OsMKK1和OsMKK6属于A亚族。而且,OsMKK1参与响应盐胁迫的信号传导过程,OsMKK6参与响应低温胁迫的信号传导过程。为进一步研究OsMKK1和OsMKK6在水稻MAPK信号传导途径中的作用机制,本研究从酵母双杂交水稻低温cDNA文库中大规模筛选与OsMKK1和OsMKK6上/下游互作的蛋白;并利用CRISPR/Cas9技术和qRT-PCR创建并鉴定了OsMKK1和OsMKK6突变体株系。主要结果如下:为筛选出与OsMKK1或OsMKK6互作的蛋白,构建了pGBKT7-MKK1和pGBKT7-MKK6两个诱饵载体,并检测了它们的自激活特性,  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北林业大学
东北林业大学

利用酵母双杂交技术筛选拟南芥AtSnRK2.4的互作蛋白

SnRK2(sucrose non-fermenting 1-related protein kinase 2)是一类植物中特有的丝氨酸/苏氨酸类蛋白激酶,参与植物体内多种信号转导,在应答无机环境(盐、干旱等)胁迫以及一些基本的生理过程中起到非常重要的作用。本研究以拟南芥SnRK2成员AtSnRK2.4为研究对象,我们以AtSnRK2.4为“诱饵”蛋白通过酵母双杂交技术筛选与其有相互作用的蛋白,确定AtSnRK2.4与互作蛋白之间的相互作用关系,为探求其抗逆机理奠定基础。本研究中,构建了pGBKT7-AtSnRK2.表达载体。通过酵母双杂交技术筛选出AtSnRK2.4的互作蛋白为2-10。然后,利用体外Pull-down实验和体内的双分子荧光互补(BiFC)试验进一步证实了两个蛋白之间的相互作用关系。AtSnRK2.4蛋白具有自磷酸化作用。并且利用GFP荧光标记技术,检测到AtSnRK2.4和2-10蛋白定位在洋葱表皮细胞的胞质...  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国病原生物学杂志》2018年02期
中国病原生物学杂志

酵母双杂交技术在病原生物蛋白质研究中的应用

酵母双杂交技术在蛋白质的研究中有着重要的、不可替代的位置。在基因组蛋白质连锁图的建立、药物及其...  (本文共5页) 阅读全文>>

《生物技术进展》2015年05期
生物技术进展

酵母双杂交技术应用进展

酵母双杂交技术是鉴定蛋白互作最有效和最广泛的分子生物学技术。该技术能直接作用于活细胞,检测细胞内蛋白质互作,具有成本低、易操作、可达到全基因组水平、能进行品种间的互作鉴定等...  (本文共5页) 阅读全文>>

《遗传》2006年12期
遗传

大规模酵母双杂交技术研究蛋白质相互作用的应用

简介了酵母双杂交技术原理,总结了酵母双杂交技术大规模筛选蛋白质相互作用的基础、应用及存在的问题。因为大规...  (本文共6页) 阅读全文>>

权威出处: 《遗传》2006年12期
《山东畜牧兽医》2021年06期
山东畜牧兽医

酵母双杂交技术研究进展

酵母双杂交系统是研究活细胞内蛋白质与蛋白质之间相互作用的一种强大且常用的分子生物学技术。该技术不仅能够检测细胞内稳定的蛋白互作,而且可以检测微弱的...  (本文共3页) 阅读全文>>