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nm23-H1/rhNDPK-α的发酵、纯化及理化特性研究

目的:建立一种目标蛋白高得率的中试发酵工艺和高效分离纯化工艺,以便获得较大量具有生物学活性的rhNDPK-α。方法:利用抗性鉴定、质粒抽提后双酶切鉴定、以及表达鉴定来研究重组工程菌继代培养50次后菌的遗传稳定性;通过研究培养基中不同成分对菌生长及表达的影响效果,来确定培养基中各成分的浓度,在摇瓶实验的基础上确定发酵工艺;发酵后所获菌体经破碎离心后的上清液经不同的纯化流程,比较分离纯化效果;利用高压液相层析(HPLC)快速检测不同反应体系中酶比活性;将纯化后的rhNDPK-α与顺铂联有,研究其对顺铂杀伤癌细胞的增敏(协同)作用。结果:工程菌DH5α-pBVnm23-H1继代培养50代后,遗传稳定性未发生改变;利用自有培养基配方和确定的发酵工艺,中试发酵菌体湿重得率在25g/L以上,同时目标蛋白的表达量在28%以上;利用Macro-prep DEAE Support 填料进行离子交换→亲和层析→凝胶过滤的纯化流程,最终目标蛋白的纯度  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《山西中医学院学报》2014年06期
山西中医学院学报

有关前导肽影响目标蛋白表达及活性的研究与展望

选择目前已报道的5种含有前导肽的目标蛋白(枯草杆菌蛋白酶、α-水解蛋白酶、米根霉脂肪酶、华根霉脂肪酶、米黑霉脂肪酶)...  (本文共3页) 阅读全文>>

《四川大学学报(自然科学版)》2002年S1期
四川大学学报(自然科学版)

几种因素对重组大肠杆菌目标蛋白表达的影响

应用基因工程技术 ,获得能表达蛋白B的重组大肠杆菌 .在摇床条件下 ,研究了几种因素———IPTG浓度、接种不同初始浓度的菌种及培养温度对目标蛋白表达的影响 .结果表...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国食品学报》2012年07期
中国食品学报

1种提高Native-PAGE中活性目标蛋白回收率的方法

为了提高Native-PAGE电泳条带中活性目标蛋白的回收率,以木质素降解酶粗酶为材料,分析了超声处理对Native-PAGE中活性目标蛋白回收的影响。通过比较超声组与对照组的活性目标蛋白回收率,结果表明超声处理能促进Na...  (本文共7页) 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

人呼吸道合胞病毒裂解纯化疫苗的初步研究

目的采用成熟的病毒裂解纯化疫苗制备技术,以人类呼吸道合胞病毒(humanrespiratory syncytial virus,HRSV)野毒株中能诱导保护性抗体的F蛋白和G蛋白为目标蛋白,研究有效裂解HRSV和纯化目标蛋白的方案。为获得免疫原性强、安全性高的HRSV裂解纯化亚单位疫苗做前期基础研究。方法本研究分为两部分,一部分是通过SDS-PAGE蛋白电泳观察Triton X-100、NP-40等几种常见裂解剂,在时间、温度和浓度三种因素改变的情况下对HRSV裂解的效果,以筛选出针对目标蛋白裂解效果较好的裂解方案,并对这些裂解方案裂解过的样品进行蛋白免疫印迹(Western-blot)实验和透射电镜检查。另一部分是以蔗糖密度梯度离心法对裂解后的样品进行目标蛋白的纯化。摸索这种方法下,针对目标蛋白较佳的纯化条件。继而纯化出一定量的目标蛋白并免疫小鼠,一月后处死采血,再进行中和实验验证我们纯化出的目标蛋白的免疫原性和检测其抗体效价...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

南方医科大学
南方医科大学

HSPC238相互作用蛋白的初步筛选及验证

研究背景和目的原发性肝细胞癌(Hepatocellular caicinoma,HCC;简称肝癌)是临床上常见的恶性肿瘤,近年来随着乙型和丙型肝炎病毒的感染率在世界范围内的增加,肝癌的发病率也逐渐上升,有报告显示,每年有新发肝癌超过70万例。目前肝癌已成为世界上第五大最常见的恶性肿瘤,肝癌致死率在癌症死亡率中排名第三。只有约15%的肝癌有机会通过手术治愈(例如,肝切除或移植)或微创局部治疗(例如,射频消融)。随着医学影像等技术手段的提高,肝癌的早期诊断和治疗虽取得了巨大进步,但长期预后仍不理想,有学者研究报道,肝癌患者平均的5年生存率仅为8.9%。大多数肝癌是由慢性肝病(如乙肝、丙肝、酒精肝等)发展而来的,但仍有15-50%的新发病例病因不清。肝癌的早期转移是影响其临床预后的一个重要因素,在这一复杂过程中,涉及到多基因、多蛋白的参与。当前对肿瘤发生发展机制的研究大多关注癌基因、抑癌基因、小分子RNA等单个或多个分子的作用和功能,...  (本文共109页) 本文目录 | 阅读全文>>