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新型人降钙素基因在大肠杆菌中的表达

降钙素是一种重要的肽类激素,在肌体的钙磷代谢,骨的形成、分化和发育等相关的诸多环节中起着关键性作用。降钙素在临床上应用十分广泛,但其自然来源有限,必须以基因工程手段进行大规模生产才能满足需求。原核系统中表达出的降钙素无法完成C-末端的酰胺化,尚需体外处理才能具有较强的生物活性。本文利用PCR技术扩增新型人降钙素基因编码序列hCT(将编码C-末端脯氨酸的密码子换为编码谷氨酰氨的密码子),将此基因克隆入大肠杆菌非融合型表达载体pBV220及融合型表达载体pET42a中。重组表达载体pET42a/hCT转化到大肠杆菌BL21(DE3)plys中诱导表达,经SDS-PAGE证实细胞裂解物中含有与预期位置相同的融合蛋白,经Western Blot鉴定证明此融合蛋白具有人降钙素的免疫活性。表达条件优化后,可溶性蛋白的表达量占胞内总蛋白的10%。经超滤浓缩后,融合蛋白在Xa因子作用下产生重组的新型降钙素,进一步分离纯化得到该蛋白的初级纯品。大  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

鸡降钙素基因重组质粒的构建及其在蛋鸡体内的表达研究

降钙素是动物体内钙磷调节的主要激素之一。降钙素的主要生理作用是抑制破骨细胞来调节人和动物体内钙的代谢。因此被广泛的应用于治疗各骨病例如Paget氏病和各种原因引起的高血钙症以及原发性骨质疏松症。但是由于现在临床上用的降钙素大都是鲑鱼或者猪的组织提取出来的,所以一般价格昂贵。尽管现在利用基因工程技术将降钙素基因在原核细胞中进行表达,但在实际应用中还具有非常大的局限性。因此,本研究拟利用分子生物学技术构建鸡降钙素基因的真核表达质粒,在鸡体内进行表达并以此来对禽体内钙的营养调控机制进行研究,并进一步寻找利用基因注射来解决生产中由于的钙的营养不足而引起的各种缺乏症的可行性。本研究就是通过已知的鸡降钙素基因序列设计引物,用逆转录多聚酶链反应扩增出鸡降钙素cDNA,将其插入真核表达载体pCEP4和pcDNA3中构建鸡降钙素基因的真核表达质粒,经酶切和PCR鉴定,确定得到了cCT的真核表达重组质粒pCEP4-CT和pcDNA3-CT。将获得的...  (本文共41页) 本文目录 | 阅读全文>>

《临床医药文献电子杂志》2018年29期
临床医药文献电子杂志

降钙素治疗老年性骨质疏松症疼痛临床疗效研究

目的探讨降钙素对老年性骨质疏松症患者疼痛程度的改善效果。方法对照组给予口服钙剂治疗,研究组经口服钙剂联合降钙素治疗。结果两组治疗完成率均为100.00%,治疗前...  (本文共1页) 阅读全文>>

《数理医药学杂志》2015年08期
数理医药学杂志

白细胞、C反应蛋白及前降钙素水平在新生儿感染性疾病诊断中的价值比较及联合应用

目的:探讨白细胞、C反应蛋白及前降钙素水平在新生儿感染性疾病诊断中的不同价值与比较及其联合应用的效果。方法:某院2012年1月~2014年1月收治的患有感染性疾病的新生儿40例进行白细胞、C反应蛋白及前降钙素水平检测,同时选择正常新生儿40例进行同样检测,对比两组新生儿白细胞、...  (本文共2页) 阅读全文>>

《基层医学论坛》2015年27期
基层医学论坛

前降钙素在小儿肺炎诊断中的价值研究

目的探讨前降钙素在小儿肺炎诊断中的价值。方法我院2013年5月—2014年5月收治小儿肺炎100例,依据相关检测,按细菌组60例和病毒组40例划分,收取50例同时间段健康儿童设为对照组。对各组检测血清前降钙素的结果展开对比。结果细菌组检测结果示,前降钙素阳性...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国妇幼保健》2013年15期
中国妇幼保健

前降钙素在小儿肺炎诊断中的应用价值

目的:分析小儿肺炎患者的血清前降钙素水平,探讨血清前降钙素在小儿肺炎的诊断和治疗上的应用价值。方法:选取2010年10月~2011年10月期间108例小儿肺炎患者,根据相关检测结果将以上患儿分为细菌感染组和病毒感染组。同时选取同期健康儿童30例作为对照组。对以上3组患儿行血清前降钙素的检测,以0.5 ...  (本文共3页) 阅读全文>>