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重组类人胶原蛋白HCB1分离纯化研究

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·西北大学

本文通过基因工程菌高密度发酵获得类人胶原蛋白胞内产物,通过菌体破碎及一系列处理分离和纯化类人胶原蛋白HCB1,得到了获得高纯度类人胶原蛋白的优化工艺条件。(一)粗提:采用超声破碎法破碎20分钟,破碎率可达87%,破碎液中类人胶原蛋白浓度达2.78g/L;用饱和度范围为15~65%的硫酸铵盐析,采用L_9(3~4)正交表,经方差分析确定盐析条件为pH 2.9,温度10℃,蛋白浓度2g/L,盐析后类人胶原蛋白纯度达36.8%,回收率达90.2%。(二)纯化:采用了两种方法并进行了对比。(1)离子交换层析与凝胶过滤层析相结合。采用批量层析的操作方法在pH7.5条件下用DE52树脂吸附杂蛋白,收集吸附后的上清液,经Sephadex G—100凝胶过滤层析柱,洗脱液为20mmol/L Tris—HCl(pH7.5含20mmol/L NaCl)缓冲液。可获得纯度为98%的类人胶原蛋白,总回收率为60.7%。(2)金属离子螯合亲和层析一步纯化  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>