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重组人血清白蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达

人血清白蛋白是一种在医学上应用广泛,需求量大的蛋白质药物。而目前血浆提取生产的方式难以满足市场的要求,用基因工程方法生产人血清白蛋白无疑具有巨大的商业价值。由于巴斯德毕赤酵母表达系统自身的许多优点,使得其在表达外源蛋白中具有十分大的优势。本文的工作是用巴斯德毕赤酵母(Pichia Pastoris)构建并筛选分泌重组人血清白蛋白(rHSA)基因工程高产菌株,并对其发酵纯化条件进行初步研究。在构建高产人血清白蛋白的基因工程菌时,采用了分泌型表达质粒pPIC9K构建成质粒pPIC9K-hsa。构建的质粒经线性化后电转化整合进入毕赤酵母GS115染色体AOX1基因中,通过MD/MM平板筛选出his+Muts型菌株。在此基础上,用G418平板筛选出高拷贝表达子。BMGY/BMMY摇瓶培养对不同的拷贝子进行筛选,发现随着拷贝子的增加表达量增加。其中菌株GS115-rHSA-8表达量最高。免疫印迹检测所表达的rHSA具有免疫原性。采用工业基  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京化工大学
北京化工大学

巴斯德毕赤酵母发酵生产重组人血清白蛋白的研究

人血清白蛋白是血浆中最丰富的蛋白质成分,约占血浆总蛋白的60%,在人体内具有维持血液渗透压和携带血液中多种配基与组织进行交换等生理功能。临床医疗中用于手术输血和危重病人补液,治疗创伤休克、发烧、水肿和大出血,且能增强人体抵抗力,是重要的临床药物。本文对毕赤酵母(Pichia pastoris)发酵生产重组人血清白蛋白(rHSA)的高密度培养条件及离子交换层析初步分离rHSA粗品进行了研究。对毕赤酵母发酵生产人血清白蛋白生长期培养条件的初步考察可以确定选用YPD作为种子培养基,装液量50ml/500ml三角瓶,甘油浓度4%,(NH4)2SO4 浓度10g/L,PTM1浓度4ml/L,第一阶段结束后不离心直接流加甲醇诱导。在全合成培养基的基础上考察了诱导过程中添加(NH4)2SO4、微量元素PTM1、油酸、甲醇加量及pH等因素对重组人血清白蛋白表达的影响,发现PTM1能显著提高白蛋白的表达,每12小时补加2-6ml/L甲醇的PTM1...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物技术通讯》2016年04期
生物技术通讯

人血清白蛋白及其重组表达研究进展

人血清白蛋白在医疗方面有广泛的应用,其可作为血容量扩张剂和辅助治疗剂、培养基组分和保护剂、药物制剂、诊断试剂和医疗器械包被剂等...  (本文共4页) 阅读全文>>

《技术与市场》2010年06期
技术与市场

稻米生产人血清白蛋白技术

人血清白蛋白是指人血浆中的蛋白质,在血浆中其浓度为42g/L,约占血浆总蛋白...  (本文共1页) 阅读全文>>

《生物医学工程学杂志》2009年04期
生物医学工程学杂志

重组人血清白蛋白的研究进展

人血清白蛋白(Human serum albumin,HSA)是现代医学中一种重要的临床生物制品,主要用于维持血浆胶体渗透压及作为血浆容量扩充剂,广泛应用于出血性休克、烧伤、癌症、白细胞增多症、白蛋白过少症等...  (本文共4页) 阅读全文>>

《广东农业科学》2009年12期
广东农业科学

我国成功研制稻米生产人血清白蛋白技术

我国人血清白蛋白每年临床需要110~120 t,目前血浆供应不足,市场缺口高达60~80 t。武汉大学...  (本文共1页) 阅读全文>>