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杆状病毒在转P35基因昆虫细胞系中连续传代的研究

昆虫细胞作为重组病毒的受体能成功高效地表达外源基因,生产具有重要医用价值、具备天然活性的生物工程制品,从而使昆虫细胞培养倍受青睐。目前,可以通过转基因的方法改良现有细胞,从而获得高产昆虫杆状病毒和外源蛋白的昆虫细胞系。本研究是将粘虫的胚胎细胞系NEAU-Ms-7311和转P35基因细胞系TMsF分别接种昆虫病毒MsNPV和AcNPV,发现AcNPV对两种细胞的感染速度较快,感染率较高,尤其是对TMsF,最高感染率可达74%。用96孔板对转基因细胞进行克隆,共得到转基因细胞克隆株15株。通过细胞传代,选出生长且状况良好的克隆株共有11株,命名为CT-1、CT-2…CT-11.11株细胞系分别经PBS处理和多角体产量比较筛选出2个细胞克隆株:CT-7和CT-8.接种毒原AcNPV进行离体传代10代,发现AcNPV对对照细胞TMsF和克隆细胞株CT-8的感染率和OB产量都有明显下降趋势,而克隆细胞株CT-7的变化趋势稳定。CT-7细胞  (本文共45页) 本文目录 | 阅读全文>>

《宁夏医学杂志》2012年09期
宁夏医学杂志

p35在胰岛β细胞中的表达及作用

目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶5(CDK5)及其激活剂p35在胰岛β细胞中的表达及作用。方法分别离体培养小鼠胰岛β细胞株、Min6细胞、神经细胞及HEK293细胞,使用RT-PCR、免疫印迹和免疫沉淀等方法检测p35的表达及CDK5活性,并以小鼠胰岛β细胞株、Min6为研究体系,分为正常组(p35组)及p35+Ros组(CDK5活性抑制组),分别检测p...  (本文共4页) 阅读全文>>

《遗传》2003年06期
遗传

家蚕核型多角体病毒山东株p35基因的克隆及序列分析

根据家蚕核型多角体病毒T3株p35基因非编码区序列设计一对特异性引物,应用PCR技术从家蚕核型多角体病毒山东株中扩增得到一条10...  (本文共4页) 阅读全文>>

权威出处: 《遗传》2003年06期
中国科学院研究生院(武汉病毒研究所)
中国科学院研究生院(武汉病毒研究所)

杆状病毒介导的基因表达及p35抗生物和非生物胁迫的研究

杆状病毒是一类专一性感染节肢动物的DNA病毒,作为生物杀虫剂广泛应用于害虫防治。随着分子水平的基础研究迅猛发展,杆状病毒作为一种新型的基因治疗载体受到人们的高度重视。我们的研究拓宽了杆状病毒敏感细胞范围,同时,通过杆状病毒在哺乳动物细胞中介导功能基因的研究,进一步证明杆状病毒是一种优良的基因治疗载体。本文还通过杆状病毒抗凋亡基因p35在植物中广谱抗病反应的研究,揭示杆状病毒p35基因的较高应用价值。我们的研究进一步深化了杆状病毒及其基因的研究,为扩展其应用奠定了基础。第一章以综述的形式描述了杆状病毒的病毒学特点,同时介绍了杆状病毒的应用研究和杆状病毒广谱抗凋亡基因p35的研究现状。第二章阐明了重组杆状病毒Ac-CMV-eGFP(含有CMV启动子控制绿色荧光蛋白的重组AcMNPV)作为基因转移载体在脊椎动物鸡和鸭细胞中的转导能力,结果分析表明Ac-CMV-eGFP能高效转导鸡胚和鸭胚细胞,且在鸭胚细胞中转导能力强于鸡胚细胞。进一步...  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国预防兽医学报》2019年07期
中国预防兽医学报

基于丝状支原体丝状亚种P35反应原性的验证及其间接ELISA方法的建立

为建立检测丝状支原体丝状亚种(Mmm)的间接ELISA方法,本研究利用生物信息学软件对Mmm的全基因组序列进行了分析,选定大小为540 bp的0584基因,该基因是编码分子量为35 ku的脂蛋白,并对其免疫反应原性进行研究。利用原核表达系统获得了0584基因的重组蛋白rP35,以牛传染性胸膜...  (本文共5页) 阅读全文>>

《蚕业科学》2000年04期
蚕业科学

家蚕核型多角体病毒p35基因的核苷酸序列分析

对家蚕核型多角体病毒苏州株 (BmNPVsu)p35基因的序列分析表明 :BmNPVsup35编码序列为 897nt,编码 2 98aa。同源性分析表明 :BmNPVsup35与BmNPVT3、AcNPV、SlNPV在核苷酸水平上同源性分别为 99.5%、95.1 %、...  (本文共5页) 阅读全文>>