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增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达载体的构建与表达

目的:为研究增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因在活细胞中作为报告基因和筛选标记的可行性,特构建其真核表达载体pCDNA3.1(+)-EGFP,并将它转染至Hela细胞和大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)中,观察其在这两种细胞中的表达情况。方法:以BamH Ⅰ和Not Ⅰ双酶切分别从真核表达载体pCDNA3.1(+)和EGFP载体pEGFP-1中切取线性化pCDNA3.1(+)载体和目的EGFP基因片段,然后将两者连接起来,从而获得重组质粒pCDNA3.1(+)-EGFP,并分别以BamH Ⅰ单酶切和BamH Ⅰ、Not Ⅰ双酶切进行鉴定。以脂质体转染试剂Lipofect AMINE2000分别将构建好的重组质粒转染至培养的Hela细胞和大鼠骨髓间充质干细胞中,分别经G418筛选两周和四周后获得EGFP阳性克隆,进行细胞爬  (本文共72页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华肝脏病杂志》2006年04期
中华肝脏病杂志

乙型肝炎病毒启动子调控的增强型绿色荧光蛋白真核表达载体的构建与表达

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)启动子(含增强子)调控下的增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 报告基因在肝癌细胞中的表达。方法用聚合酶链反应(PCR)技术分别扩增出HBV的4个启动子,载入 T载体,测序后插入到含EGFP报告基因的质粒pEGFP-1,构建出HBV不同启动子调控的EGFP基因表达载体,经酶...  (本文共4页) 阅读全文>>

《医学研究生学报》2012年01期
医学研究生学报

人环指蛋白11真核表达载体的构建及表达

目的构建含有标签蛋白的人环指蛋白11(ring finger protein 11,RNF11)的真核表达载体,并观测其在293T细胞中的表达。方法使用MEGA5.0等生物学软件构建人RNF11的分子进化树;应用RT-PCR从4种人胃癌细胞系中检测到该基因的表达,并将其克隆到pEASY-Blunt载...  (本文共4页) 阅读全文>>

《临床肝胆病杂志》2012年11期
临床肝胆病杂志

HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达。方法采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PCR、双酶切、测序鉴定后,将其转染入CHO细胞,G418筛选,用PCR、免疫斑点、Western Blot、免疫细胞化学方法检测HBeAg在CHO细胞中的表达。结果成功克隆到HBeAg基因,并构建了重组pcDNA...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国医学工程》2007年03期
中国医学工程

人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因真核表达载体的构建

目的构建人可溶性肿瘤坏死因子受体1基因(sTNFR1)的真核表达载体,为进一步研究打下基础。方法以Hela细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增人sTNFR1全编码区基因片段,构建...  (本文共4页) 阅读全文>>

《重庆医学》2003年07期
重庆医学

诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体的构建

目的 构建含有人诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体pcDNA3 iNOS。方法 采用分子生物学技术 ,以HindⅢ和XbIⅠ双酶切pSPORT iNOS,电泳回收 3.96kb编码人iNOScDNA序列 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 的HindⅢ和XbIⅠ位点。...  (本文共3页) 阅读全文>>

《医学研究生学报》2003年07期
医学研究生学报

大鼠谷氨酰胺酶反义真核表达载体的构建及鉴定

目的 :构建大鼠谷氨酰胺酶 (GA)反义真核表达载体。 方法 :采用分子克隆技术将rGAcDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA 3.0中...  (本文共2页) 阅读全文>>